Processo para amplificação de uma seqüência alvo

  • Número do pedido da patente:
  • PI 9501581-7 A2
  • Data do depósito:
  • 13/04/1995
  • Data da publicação:
  • 14/11/1995
  • Prioridade unionista:
  • País Número Data
    ESTADOS UNIDOS ESTADOS UNIDOS 08/229.279 18/04/1994
Inventores:
  • Classificação:
  • C12Q 1/68
    Processos de medi??o ou ensaio envolvendo enzimas ou micro-organismos; Composições para esse fim; Processos de preparação de tais composições; / envolvendo ?cidos nucleicos;
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    C07H 21/00
    Compostos contendo duas ou mais unidades mononucleot?dicas tendo grupos fosfato ou polifosfato separados, ligados por radicais sacar?deos de grupos nucleos?deos, p. ex. ?cidos nucleicos;
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    G01N 33/58
    Investiga??o ou an?lise de materiais por m?todos espec?ficos n?o abrangidos pelos grupos ; / Material biol?gico, p. ex. sangue, urina; Hemocitr?metros; / An?lise qu?mica de material biol?gico, p. ex. sangue, urina; Testes por m?todos envolvendo a forma??o liga??es bioespec?ficas de ligantes; Testes imunol?gicos; / envolvendo substâncias marcadas;
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    C12P 19/34
    Preparação de compostos contendo radicais sacar?deos; / Preparação de carboidratos contendo nitrog?nio; / N-glicos?deos; / Nucleot?deos; / Polinucleot?deos, p. ex. ?cidos nucle?cos, oligoribonucleot?deos;
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Métodos de Amplificação de Deslocamento de Fita (SDA termofílica) que podem ser realizados sobre uma ampla faixa de temperatura (37 a 70°C). A faixa de temperatura preferida para SDA é 50 a 70 graus Celsius. Foi verificado que certas endonucleases de restrição termofílicas são capazes de corte do sítio de reconhecimento/clivagem de endonuclease de restrição hemi-mofidicado como requerido por SDA e dissociação do sítio. Foi ainda verificado que certas polimerases termofílicas são capazes de estenderem-se a partir do corte enquanto deslocando a fita à jusante. SDA termofílica, devido às temperaturas de reação maiores que previamente possíveis com sistemas de enzima SDA, tem especificidade e eficiência aperfeiçoadas, reduzida amplificação de fundo não-específica, e rendimentos potencialmente aperfeiçoados de produtos de amplificação. Em adição, a necessidade de adicionar-se as enzimas em uma etapa separada após a desnaturação térmica inicial de alvos de fita dupla é eliminada quando enzimas capazes de tolerar a temperatura de desnaturação são usadas.

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