Laura Cazetta

Idiomas

Projetos de pesquisa

• 2023 - Atual

  Geração de um cassete de expressão para silenciamento do gene tRNA ISOPENTENYL TRANSFERASE (tRNA IPT) de Moniliophtora perniciosa por interferência de RNA (RNAi), Descrição: A vassoura-de-bruxa é uma importante doença que acomete o cacaueiro (Theobroma cacao) e é causada pelo fungo basidiomiceto Moniliophtora perniciosa. O fungo é endêmico da região Amazônica, e sua introdução no sul da Bahia levou ao colapso de plantações de cacaueiro e causou importantes mudanças econômicas e sociais na região. Moniliophtora perniciosa se caracteriza por ser um fungo hemibiotrófico, mas diferentemente de outros patógenos com esse estilo de vida, M. perniciosa apresenta uma fase biotrófica sintomática e longa. Os principais sintomas da infecção são inchamento e perda de dominância apical de ramos, com a indução de brotações laterais. O estudo da doença é dificultado pois a interação ocorre entre dois organismos não modelo. Por isso, por haver um biótipo do patógeno que infecta membros da família Solanaceae (Biótipo-S) e, que quando inoculado, infecta o tomateiro (Solanum lycopersicum) é possível estudar os mecanismos de defesa e patogenicidade utilizando o tomateiro cv. Micro-Tom (MT). Utilizando MT, nosso grupo demonstrou, que pelo menos parte da resposta da planta à infecção tem relação com a sinalização por citocininas. O atlas transcriptômico de vassoura de bruxa indicou a expressão de um gene candidato a uma rota alternativa de biossíntese de citocinina, anotado como tRNA ISOPENTENYL TRANSFERASE (tRNA IPT) no micélio monocariótico, dicariótico e durante a fase biotrófica da infecção em cacaueiro. Assim, este gene necessita ser validado funcionalmente como associado a indução dos sintomas relacionados ao desbalanço de citocinina. Como não é possível manipular geneticamente M. perniciosa, pretende-se gerar plantas transgênicas de MT expressando RNAs interferente para tRNA IPT (p35S:RNAiMptRNA) para avaliar este mecanismo de virulência e o desenvolvimento de sintomas na fase biotrófica da infecção por M. perniciosa. Para tal, este projeto objetiva desenvolver um cassete de expressão para silenciamento do gene tRNA ISOPENTENYL TRANSFERASE (tRNA IPT) de M. perniciosa a ser introduzido em tomateiro.. , Situação: Em andamento; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Laura Cazetta - Integrante / Antonio Vargas de Oliveira Figueira - Coordenador / Eder Marques da Silva - Integrante.

• 2022 - 2023

  Quantificação de DNA genômico de Moliniophthora perniciosa para avaliar a colonização em mutantes de tomateiro contrastantes na sinalização de auxina, Descrição: A vassoura-de-bruxa, causada pelo fungo basidiomiceto Moniliophthora perniciosa, é uma importante doença do cacaueiro (Theobroma cacao). Os principais sintomas da doença são o inchamento dos ramos infectados e a indução acentuada de brotações laterais (vassouras), que levam a redução da produção de frutos da planta. A interação entre M. perniciosa com o cacaueiro é considerada complexa devido às características biológicas do hospedeiro e patógeno. O biótipo S de M. perniciosa é capaz de infectar naturalmente alguns membros da família Solanaceae, e por inoculação artificial, também é capaz de infectar o tomateiro (Solanum lycopersicum). O tomateiro infectado apresenta os principais sintomas presentes na fase biotrófica da doença em cacaueiro. A cultivar Micro-Tom (MT) apresenta ciclo de vida curto, porte reduzido e facilidade de transformação genética e edição genômica, e demonstrou ser um modelo genético adequado para o estudo desta interação. Uma estratégia comum a patógenos é a manipulação da sinalização hormonal do hospedeiro para favorecer o desenvolvimento da patogênese. Nesse contexto, foi demonstrado que M. perniciosa produz o hormônio auxina durante a interação com tomateiro e cacaueiro. A análise de dados de RNA-seq verificou a indução de genes responsivos a auxina em tecidos infectados de cacaueiro. A inoculação de plantas MT mutantes com maior sensibilidade a auxina (entire) por M. perniciosa (biótipo S) resultou em sintomas mais acentuados quando comparados a plantas MT inoculadas. Tais evidências sugerem uma possível contribuição do desequilíbrio da auxina no favorecimento da infecção. No entanto, não há dados suficientes que permitam afirmar como a auxina atua no processo de infecção, colonização e indução de sintomas. Este projeto tem como objetivo a avaliação sintomática de plantas MT inoculadas com mutações contrastantes para a sinalização de auxina (mutantes entire e diageatropica) em comparação aos controles. O nível de colonização do patógeno nos tecidos infectados será quantificado por qPCR, bem como a produtividade de todos os genótipos em resposta à infecção.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Laura Cazetta - Integrante / Antonio Vargas de Oliveira Figueira - Coordenador / Eder Marques da Silva - Integrante.

• 2021 - 2022

  Avaliação da suscetibilidade de linhagens transgênicas de tomateiro superexpressando o gene da via de síntese de citocinina ISOPENTENYL TRANSFERASE 3 (SlIPT3) ao fungo Moniliophthora perniciosa, Descrição: A vassoura-de-bruxa do cacaueiro (Theobroma cacao) é uma doença causada pelo basidiomiceto Moniliophthora perniciosa. Essa doença representa um dos fatores limitantes para o manejo e produção de cacau na América do Sul. Nosso grupo demonstrou empregando a cultivar miniatura Micro-Tom (MT) de tomateiro que pelo menos parte da resposta da planta à infecção com este patógeno tem relação com a sinalização de citocininas. Plantas transgênicas de tomateiro MT superexpressando o gene de degradação de citocininas AtCKX2 demonstraram menor incidência à infecção e menor severidade de sintomas. Esses resultados reforçam a hipótese que M. perniciosa pode atuar alterando a homeostase de citocininas como parte de sua patogênese. Nesse contexto, torna-se relevante gerar plantas transgênicas de tomateiro superexpressando genes da rota de produção citocininas (e.g. codificando a enzima isopentenil-transferase SlIPT3) para utilização como ferramentas em experimentos de inoculação com esporos de M. perniciosa (biótipo S) visando contrastar com dados de trabalhos anteriores gerados com plantas transgênicas de tomateiro MT superexpressando o gene AtCKX2.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Laura Cazetta - Integrante / Antonio Vargas de Oliveira Figueira - Coordenador / Eder Marques da Silva - Integrante.