Maria Eduarda Rocha Pinto

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• 2023 - 2024

  EFEITOS DO ÁCIDO OLEICO NO CULTIVO DE OÓCITOS E/OU EMBRIÕES NA BIOSSÍNTESE E ABUNDÂNCIA DE TRANSCRITOS ENVOLVIDOS NA SÍNTESE DE PROSTAGLANDINA F2 E E2, Descrição: A mortalidade embrionária precoce, ocasionada entre o 14 e 19 dias após a fertilização, determina 20 a 40 de perdas em fêmeas bovinas de corte. A redução de tal mortalidade, pelo favorecimento do reconhecimento materno-fetal, torna-se de fundamental interesse econômico nas operações de cria. Estratégias para tal, objetivam reduzir a capacidade de síntese da PGF2#945; pelo endométrio materno e/ou maximizar o estímulo anti-luteolítico induzido pelo concepto, inclusive aumentando a síntese de PGE2. No período compreendido entre o 14 e 19 dias após a fertilização, a redução na síntese de PGF2#945; aliada ao aumento na produção de PGE2 caracterizam uma condição benéfica ao estabelecimento da prenhez. O ácido oleico (C18:1 cis-9; ácido graxo ômega-9 insaturado) determina modificações na via metabólica do ácido graxo poli-insaturado n-6 na biossíntese de eicosanoides, incluindo as prostaglandinas (PG). Reportou-se que a suplementação com ácido oleico em meios de culturas celulares afeta a síntese de PG, entretanto tal efeito não foi avaliado no cultivo de oócitos e embriões bovinos produzidos in vitro. A hipótese é que a suplementação com ácido oleico no meio de cultura de maturação de oócitos in vitro (MIV) e no cultivo de embriões in vitro (CIV) aumenta a síntese de PGE2 e reduz a síntese de PGF2a; por alterar a abundância de transcritos envolvidos na síntese das PG. Objetiva-se determinar os efeitos da suplementação com ácido oleico na MIV ou CIV sobre a síntese de PGE2 e PGF2a; e na abundância de transcritos envolvidos na síntese das PG (PTGER2, PTGER4, PTGES1, PLA2G10, PTGS2, PTGES2, AKR1B1, AKR1C4). Oócitos serão colocados em placas de 4 poços, contendo 25 oócitos/poço equitativamente distribuídos em um dos quatro tratamentos, onde serão maturados em 500 L meio base MIV/poço suplementado ou não com ácido oleico (Sigma O1383) em diferentes concentrações (0, 500, 750 ou 1000 M) e o CIV será prosseguido em 500 L de meio base para CIV/poço para todos os tratamentos (Experimento 1) e, 25 oócitos/poço equitativamente distribuídos em um dos quatro poços onde serão maturados in vitro (MIV) em 500 L meio base MIV/poço e o CIV será prosseguido em 500 L meio base para CIV/poço suplementado ou não com ácido oleico em diferentes concentrações (0, 500, 750 ou 1000 M (Experimento 2). Serão realizadas 8 repetições experimentais para a MIV e 8 repetições experimentais para o CIV, onde a cada repetição será cultivado inicialmente 25 oócitos por grupo de tratamento. As concentrações de PGE2 e PGF2#945; no meio de cultivo serão determinadas por ensaio de imunoabsorção enzimática - ELISA. A abundância de transcritos será avaliada por RT-qPCR. A análise estatística será realizada pelo PROC MIXED do SAS. Considerando as perdas econômicas ocasionadas pela mortalidade embrionária precoce na fase de cria, caso venha a ser comprovado um efeito benéfico de tal suplementação, tal conceito possibilitará a determinação de estratégias a campo que possam reduzir a mortalidade embrionária precoce e, desta forma, melhorar as taxas de concepção em programas de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e transferência de embriões em tempo fixo (TETF).. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Graduação: (1) / Mestrado acadêmico: (1) / Doutorado: (1) . , Integrantes: Maria Eduarda Rocha Pinto - Integrante / Claudia Maria Bertan Membrive - Coordenador / Lucas de Oliveira Bezerra - Integrante.

• 2022 - 2023

  EFEITOS DO SISTEMA TRIDIMENSIONAL E DA MELATONINA NO CULTIVO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS, Descrição: A produção in vitro de embriões bovinos (PIVE) é uma biotécnica em crescente emprego e aperfeiçoamento. A PIVE compreende a maturação oocitária, fertilização e cultivo embrionário; realizadas in vitro. Tais etapas comumente são conduzidas em sistemas de cultivo bidimensionais (2D), onde parte das estruturas cultivadas ficam em contato direto com a superfície da placa de cultivo. Durante o cultivo in vitro dos embriões, uma determinada área de superfície do mesmo fica em contato direto com à superfície da placa, condição que reduz a área de troca entre o embrião e o meio de cultivo. Além disso, a manipulação dos embriões durante os procedimentos de cultivo predispõe a elevação das espécies reativas de oxigênio, condição que promove um favorecimento do estresse oxidativo e dos mecanismos apoptóticos. Para contornar as limitações presentes no sistema 2D, diferentes sistemas de cultivo tridimensionais (3D) estão sendo desenvolvidos. Recentemente foi lançado um sistema para cultivo 3D denominado CellFate (Biocelltis, S.A., Brasil), cujas matrizes são biomateriais em forma de hidrogel, compostos por nanofibras poliméricas naturais cuja organização tridimensional assemelha-se a matriz extracelular, condição que proporciona um microambiente adequado para o crescimento de diversos tipos celulares. Até o momento não foram realizadas pesquisas que avaliassem o seu emprego na PIVE. Adicionalmente, a membrana 3D CellFate também oferece, no momento de sua confecção, a possibilidade de introduzir moléculas de interesse com potencial para favorecer as estruturas cultivadas. Tais moléculas agregadas à membrana, seriam lentamente e constantemente liberadas para o meio de cultivo. Nesse contexto, a melatonina, é uma excelente candidata para ser agregada à membrana, pois trata-se de uma importante molécula com ação antioxidante e antiapoptótica no desenvolvimento de embriões. A hipótese é que o sistema de cultivo 3D, utilizando Membrana CellFate contendo melatonina em sua composição, utilizado no cultivo in vitro dos embriões, incrementa o número e qualidade dos embriões produzidos por PIVE. Objetiva-se avaliar o impacto do cultivo in vitro de embriões em sistema 3D com a membrana CellFate, acrescida ou não com melatonina, sobre as taxas de produção embrionária (taxa de clivagem no D3 e taxa de blastocisto no D7; D0 = dia da fertilização). Complexos cumulus-oócito (CCOs) serão obtidos a partir de ovários colhidos em abatedouro de vacas Nelore. Apenas CCOs com múltiplas camadas de células do cumulus compactas e citoplasma homogêneo serão maturados in vitro durante 24 horas e fertilizados in vitro durante 18 horas. Placas de 4 poços, contendo 500 L de meio de cultivo por poço, serão utilizadas para a PIVE em incubadora com atmosfera úmida contendo 5 de CO2. Após a fertilização, os possíveis embriões serão desnudados por sucessivas pipetagens em meio de lavagem e posteriormente distribuídos em 4 grupos: sistema 2D com poço contendo 500 L de meio fluido de oviduto sintético SOF (Grupo Controle); sistema 3D contendo a membrana CellFate sob os embriões em poço de cultivo contendo 500 L de meio SOF (Grupo 3D); sistema 3D contendo a membrana CellFate enriquecida na confecção com melatonina sob os embriões em poço contendo 500 L de meio SOF (Grupo 3DM) ou sistema 3D contendo a membrana CellFate sob os embriões em poço de cultivo contendo 500 L de meio SOF este acrescido de melatonina (Grupo 3D + M). Serão realizadas cinco repetições experimentais. A dose de melatonina a ser adicionada ao meio de cultivo ou à membrana será definida com base nos resultados observados em estudo prévio que está sendo finalizado no momento (estudo prévio de dose-resposta em conclusão). A taxa de clivagem embrionária será avaliada no 3 dia de cultivo (D3). A taxa de blastocistos será avaliada no 7 dia de cultivo (D7), onde os blastocistos serão classificados.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Graduação: (1) / Mestrado acadêmico: (1) / Doutorado: (1) . , Integrantes: Maria Eduarda Rocha Pinto - Integrante / Adriano Felipe Mendes - Integrante / Claudia Maria Bertan Membrive - Coordenador.