Karine Rodrigues

Formação complementar

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Participação em eventos

Produções bibliográficas

• RODRIGUES, K. ; THIESEN, F.V. ; Chatkin, J. M. ; Machado, J. B . Níveis urinário de 1-hidroxipireno em mulheres grávidas fumantes e não fimantes. 2011. (Apresentação de Trabalho/Seminário).

• RODRIGUES, K. ; THIESEN, F.V. ; Chatkin, J. M. ; Machado, J. B . Validação de método para determinação de cotinina em líquido amniótico. 2011. (Apresentação de Trabalho/Seminário).

• RODRIGUES, K. ; THIESEN, F.V. ; Chatkin, J. M. ; Machado, J. B . Níveis urinários de 1-hidroxipireno em mulheres grávidas fumantes e não fumantes. 2011. (Apresentação de Trabalho/Seminário).

• THIESEN, F.V. ; RODRIGUES, K. ; Chatkin, J. M. ; Machado, J. B . Urinary levels of 1-hydroxypyrene in smoking and nonsmoking pregnant women. 2011. (Apresentação de Trabalho/Congresso).

• RODRIGUES, K. ; THIESEN, F.V. ; Chatkin, J. M. ; Machado, J. B . Validação de método para determinação de cotinina em líquido amniótico. 2011. (Apresentação de Trabalho/Congresso).

• RODRIGUES, K. ; THIESEN, F.V. ; Marder, L. S. ; Petersen, G. O. ; Chatkin, J. M. ; Machado, J. B . Validação de método para determinação de 1-hidroxipireno urinário. 2011. (Apresentação de Trabalho/Congresso).

Projetos de pesquisa

• 2010 - 2011

  Validação de método para determinação de cotinina em líquido amniótico, Descrição: O tabagismo é atualmente um dos principais problemas de saúde pública. É considerado fator de risco para diversas doenças como cânceres, doenças cardiovasculares e respiratórias (Nakajima et al., 2000). A nicotina é o maior constituinte do tabaco, sendo que um cigarro contém, em média 8,4 mg desse composto, que é o responsável por causar dependência. Quimicamente, é uma amina terciária composta de anéis piridina e pirrolidina. Apenas de 10 a 20% de toda nicotina inalada é excretada sob a forma inalterada e o principal metabólito de biotransformação da nicotina é a cotinina, um marcador biológico útil para essa exposição e é usado em larga escala para validar a auto-relatados de tabagismo. A cotinina tem uma meia vida de 15-40 horas em adultos e 37-160 horas em crianças. A partir disso a determinação de cotinina em líquido amniótico é relevante para medir a exposição do feto ao tabaco durante a gravidez (Sant?Anna, 2010). Até a vigésima semana de gestação, as secreções maternas são as principais contribuintes para a formação de líquido amniótico, com alguns componentes provenientes das secreções do feto. Após este período, a urina, as secreções de fluidos fetais e do pulmão tornam-se as principais fontes de líquido amniótico, como um meio de proteção do feto. Mais do que qualquer outro compartimento, o líquido amniótico acumula substâncias solúveis em água, mas também pode conter compostos parentais e seus metabólitos, o que expõe o feto durante toda gravidez a diversas substâncias tóxicas (Malafatti e Martins, 2009). A presença de cotinina no líquido amniótico indica que o feto tem exposição ao tabaco. Outras amostras, como sangue e urina, são invasivas ou de difícil coleta em recém-nascidos. Esse trabalho tem como objetivo validar um método para detecção de cotinina em líquido amniótico, a fim de verificar a exposição de recém-nascidos ao tabaco durante o período fetal. A partir de um método para determinação de cotinina já validado para amostras de soro, adaptamos o mesmo para a quantificação em líquido amniótico. O procedimento analítico envolve extração líquido-líquido com 1,0 mL de líquido amniótico, utilizando como padrão interno 2-fenilimidazol 0,25 ug/mL. A extração foi feita com diclorometano, onde se retira a fase aquosa depois de homogeneização e centrifugação. A fase aquosa foi extraída novamente para maior reprodutibilidade, e logo após a fase orgânica foi evaporada sob ar comprimido a 37°C e o extrato foi reconstituído com 200 uL da fase móvel (Água MilliQ, Metanol, Acetato de sódio 0,1M e Acetonitrila - 50:15:25:10 v/v em pH 4,4) para injeção em Cromatógrafo Líquido de Alta Eficiência Agilent 1100® series, com separação em coluna de fase reversa (Zorbax Eclipse XDB-C8 4,6x150mm e 5u), sob fluxo isocrático de 0,5 mL/min e detecção ultravioleta em 261 nm. O tempo total da corrida foi de 10 minutos, sendo que o tempo de retenção para cotinina foi aproximadamente de 6,8 minutos e para o padrão interno foi de 5,6 minutos. Considerando que o método foi previamente validado para amostras de soro (Petersen et al., 2010), foi realizada validação parcial. Validação parcial é empregada sempre que ocorrem modificações no método bioanalítico já validado, como mudança de matriz, no procedimento de preparação da amostra, na metodologia ou na substituição do sistema de detecção. Foram determinados os parâmetros limite inferior de quantificação (LIQ), linearidade, exatidão, precisão interdia e intradia, segundo as exigências da ANVISA (2003). O coeficiente de correlação foi superior a 0,998 no intervalo de 2,0 a 200,0 ng/mL, sendo o limite inferior de quantificação de 2,0 ng/mL. Os valores de precisão intra e inter-ensaio apresentaram coeficiente de variabilidade (CV) de 3,89 a 13,99% e exatidão de 82,23 a 91,47%. O método apresentou linearidade, LIQ, precisão e exatidão dentro dos limites aceitáveis pela ANVISA.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Karine Rodrigues - Integrante / Flavia Valladão Thiesen - Coordenador / Julia de Barros Machado - Integrante / José Miguel Chatkin - Integrante.

• 2010 - 2011

  Níveis urinários de 1-hidroxipireno em mulheres grávidas fumantes e não fumantes, Descrição: O tabagismo é considerado um fator de risco para patologias como doenças cardiovasculares e cânceres. O cigarro expõe os indivíduos a inúmeras substâncias tóxicas e é responsável por cerca de cinco milhões de mortes por ano em todo o mundo. Associações entre exposição fetal aos constituintes do tabaco e indicadores do estado de saúde fetal foram documentadas. O uso de biomarcadores tem sido estudado para avaliar a exposição fetal aos principais componentes do tabaco, mostrando as propriedades cancerígenas em estudos epidemiológicos ou animais. Dentre os marcadores está o 1-hidroxipireno (1-OHP), principal metabólito do pireno, um hidrocarboneto aromático policíclico (HPA) gerado a partir da combustão incompleta de materiais orgânicos presentes na fumaça do cigarro, no ambiente e na alimentação. O objetivo deste estudo foi medir os níveis de 1-OHP urinário em gestantes e verificar se há diferença entre esses níveis em fumantes e não fumantes. Foram incluídas 48 mulheres grávidas (de 18 a 35 anos) pertencentes a grupo de baixo risco, sem patologias concomitantes. No dia do parto foi coletada urina de todas as participantes para a avaliação de cotinina e 1-OHP, os quais foram medidos por cromatografia líquida de alta eficiência. A avaliação do uso de tabaco foi baseada em níveis de cotinina. Média e desvio-padrão foram usadas para descrição de 1-OHP urinário, e ANOVA one-way foi aplicada para comparar os níveis de 1-OHP em não fumantes e fumantes. Entre as mães fumantes, a concentração média de 1-OHP urinário foi 0,204 umol/mol creatinina (n=15, DP=0,223), enquanto nas não fumantes a concentração média de 1-OHP foi 0,120 umol/mol creatinina (n=33, DP=0,109). A diferença não foi significativa entre os grupos (p = 0,080). Apresentamos dados preliminares de estudo que pretende avaliar cerca de 300 mulheres grávidas e seus recém-nascidos. O número de cigarros fumados por dia, tempo de tabagismo e status de recém-nascidos são registrados, mas estas variáveis não foram consideradas até agora devido ao tamanho da amostra. Neste estudo, o 1-OHP urinário foi incapaz de indicar maior exposição à HAP em mães fumantes. A fim de avaliar melhor a exposição intrauterina a HAP, uma amostra maior, o padrão de fumar, o estado de recém-nascidos e o uso de outras amostras biológicas deve ser considerado.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Karine Rodrigues - Integrante / Flavia Valladão Thiesen - Coordenador / Julia de Barros Machado - Integrante / José Miguel Chatkin - Integrante.

• 2009 - 2010

  Validação de método para determinação de 1-hidroxipireno urinário, Descrição: Os Hidrocarbonetos Aromáticos Policíclicos (HAPs) são substâncias químicas geradas a partir da combustão incompleta da matéria orgânica, como carvão, derivados do petróleo e fumaça de cigarro (LEE, M.S., et al, 2007). O pireno é um derivado dos HAPs, tendo como metabólito majoritário o 1-hidroxipireno (1-OHP) urinário. Estes compostos e seus derivados estão associados a diversos tipos de cânceres. Estudos demonstraram níveis significativamente elevados de 1-OHP em fumantes quando comparados com não-fumantes. Os níveis de 1-OHP variam consideravelmente em não-fumantes e estão associados à poluição ambiental e a alimentação. Essas concentrações podem ser influenciadas por polimorfismos genéticos (IARC, 2004). Por isso, faz-se necessário a validação de um método. Inicialmente, 2,5 mL de urina foram diluídos com 5 mL de tampão acetato pH 5,0 e 10 uL da enzima ȕ-glucuronidase/arilsulfatase foram adicionados para iniciar o procedimento de hidrólise enzimática do 1-hidroxipireno (LIA, H. et al. 2000). Após 2 horas em banho de aquecimento a 37 C, prosseguiu-se com extração em fase sólida utilizando cartuchos C18 (500mg) (ATES, I. 2004). Os cartuchos C18 foram inicialmente condicionados com 2 mL de metanol e 5,0 mL de água Milli-Q. A seguir, foi adicionado todo o volume da amostra previamente diluída e 6,0 mL de metanol 60% para retirar as impurezas. O 1-hidroxipireno foi extraído da sílica com 2,0 mL de isopropanol e a amostra recolhida foi concentrada sob ar comprimido e ressuspendida com 250 uL de metanol para injeção em Cromatógrafo Líquido de Alta Eficiência marca Agilent 1100® series, equipado com degaseificador, bomba isocrática e detector de fluorescência. A separação cromatográfica foi realizada utilizando uma coluna de fase reversa C18, o comprimento de onda de excitação foi de 242 nm e o de emissão foi de 388 nm. A temperatura da coluna foi mantida em 23ºC com o auxílio de termostato. A fase móvel utilizada foi metanol:acetonitrila:água MilliQ 35:35:30 (v/v/v), com fluxo de 1mL/min. O tempo total de corrida foi de 12 minutos, sendo que o tempo de retenção para o 1-OHP foi de 10,6 minutos (Figura 1). Para validação do método foram determinados os parâmetros limite de detecção (LD), limite de quantificação (LQ), linearidade, precisã o interdia e intradia, recuperação, robustez e estabilidade, segundo as exigências da ANVISA(2003). O método apresentou linearidade, sensibilidade, recuperação, precisão e exatidão dentro dos limites aceitáveis. O coeficiente de correlação foi superior a 0,999 no intervalo de 0,1 a 10,0 ng/mL, sendo o limite de detecção de 0,045ng/mL e o limite de quantificação de 0,1 ng/mL com coeficiente de variação (CV) de 3,4% e exatidão de 97,6%. Os valores de precisão intra e inter-ensaio (Tabela 1) apresentaram CV de 5,4 a 12,7% e exatidão de 87,2 a 93,0%. As recuperações absoluta e relativa são mostradas na Tabela 2 e foram determinadas adicionando padrão de 1-hidroxipireno em água nas concentrações baixa, média e alta da curva de calibração. Os resultados mostraram-se satisfatórios uma vez que foi possível atender a todos os parâmetros exigidos pela ANVISA e o método demonstrou ser viável de aplicar na rotina laboratorial.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Karine Rodrigues - Integrante / Flavia Valladão Thiesen - Coordenador / Laura Schirbeck Marder - Integrante / Guilherme Oliveira Petersen - Integrante.

Prêmios