ISABELLY ANNUNCIATO

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Projetos de pesquisa

• 2023 - Atual

  Estudo por dinâmica molecular da interação entre as nitrosaminas e a proteína PAF-AH plasmática acoplada a membrana lipossomal, Descrição: Processo:23/01973-4Modalidade de apoio:Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - MestradoVigência (Início):01 de setembro de 2023Vigência (Término):22 de dezembro de 2023Área do conhecimento:InterdisciplinarPesquisador responsável:Marcos Hikari ToyamaBeneficiário:Isabelly AnnunciatoSupervisor:Sergio Filipe Maia de SousaInstituição Sede:Instituto de Biociências (IB-CLP). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus Experimental do Litoral Paulista. São Vicente , SP, BrasilLocal de pesquisa:Universidade do Porto (UP), Portugal Vinculado à bolsa:22/04772-7 - Avaliação da toxicidade hepática aguda e inflamação induzida por nitrosaminas em Mus musculus e Danio rerio, BP.MSAssunto(s):Função hepática Inflamação aguda Mus musculus Nitrosaminas Biologia computacionalPalavra(s)-Chave do Pesquisador:Danio r | função hepática | inflamação aguda | Mus musculus | Nitrosaminas | BioinformáticaResumoAs nitrosaminas são compostos classificados como contaminantes emergentes, carcinogênicos e oxidantes. Elas podem alterar as propriedades das membranas celulares e induzir um aumento dos lipídios biologicamente ativos, como o ácido araquidônico e o PAF, um potente agente pró-inflamatório capaz de induzir o aparecimento de doenças hepáticas e inflamatórias. A Lp-PLA2 (alternativamente conhecida como fator de ativação plaquetária-acetil-hidrolase - PAF-AH) é uma enzima que catalisa a hidrólise de PAF e pertence à superfamília PLA2, ela está associada estruturalmente a lipoproteína plasmática HDL. Como a Lp-PLA2 hidrolisa o PAF em sua forma inativa (lyso-PAF), os níveis de Lp-PLA2 são propostos para serem determinados por níveis in vivo de PAF, podendo, dessa forma, servir como marcadores de PAF. Por catabolizar o PAF, a Lp-PLA2 parece desempenhar um papel anti-inflamatório. Neste trabalho, usaremos duas nitrosaminas (N-Nitrosodietilamina e N-Nitrosodimetilamina) para realizar estudos de dinâmica molecular que serão realizados no laboratório BioSIM (Universidade do Porto) com o objetivo de avaliar a interação molecular destas nitrosaminas sobre a proteína Lp-PLA2, sobre a membrana lipídica e sobre a interface de interação da proteína Lp-PLA2. Essa avaliação bioquímica e biofísica, será realizada usando o software AMBER para identificar o comportamento estrutural da proteína e dos complexos acoplados. Estas simulações serão realizadas com a inserção das proteínas num modelo de bicamada lipídica heterogêneo, representativo da membrana plasmática humana, com uma distribuição adequada dos diferentes componentes lipídicos.. , Situação: Em andamento; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Mestrado acadêmico: (1) . , Integrantes: Isabelly Annunciato - Integrante / Marcos Hikari Toyama - Coordenador / Sergio F. Sousa - Integrante., Financiador(es): Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - Bolsa.

• 2022 - Atual

  Avaliação da toxicidade hepática aguda e inflamação induzida por nitrosaminas em Mus musculus e Danio rerio, Descrição: As nitrosaminas são compostos classificados como contaminantes emergentes, carcinogênicos e oxidantes. Podem alterar as propriedades das membranas celulares e induzir um aumento dos lípidos biologicamente ativos, como o ácido araquidónico e o PAF, um potente agente pró-inflamatório capaz de induzir o aparecimento de doenças hepáticas. Neste trabalho, utilizaremos duas nitrosaminas (N-Nitrosodietilamina e N-Nitrosodimetilamina), escolhidas por serem as mais encontradas comercialmente, para induzir inflamação e hepatotoxicidade aguda em espécimes de Mus musculos, estas serão expostas a diferentes concentrações de cada uma das nitrosaminas, para realizar análises bioquímicas, histológicas e hematológicas subsequentes que mostrarão possíveis danos hepáticos induzidos pela exposição a estes contaminantes. Amostras do sangue dos camundongos serão coletadas, e subsequentemente, o fígado será submetido a uma avaliação histológica. Uma alíquota da reserva de sangue coletada dos grupos expostos e não expostos a nitrosaminas será submetida a análise hematológica, utilizando técnicas de esfregaço e subsequente contagem de células em câmara Neubauer. Outra alíquota será utilizada para análise bioquímica da desidrogenase láctica, transaminase oxalacetica (TGO), transaminase pirúvica (TGP), gama-glutamil transferase (GGT), e proteína C reactiva, para monitorar possíveis alterações hepáticas. Além disso, avaliaremos os níveis de interleucina 6 (IL-6), o fator de necrose tumoral alfa (TNF alfa), os níveis de malondialdeído (MDA), e a enzima fosfolipase A2 associada a lipoproteína (Lp-PLA2), também conhecida como fator de ativação plaquetária acetil-hidrolase (PAF-AH), pois esta é crucial no processo de controle da inflamação, sendo considerada uma proteína anti-inflamatória, uma vez que a PAF-AH atua regulando os níveis plasmáticos do fator de ativação plaquetária (PAF), um fator lipídico extremamente importante na progressão e desenvolvimento do processo inflamatório. Assim, o presente projeto visa mostrar que as nitrosaminas são agentes que podem induzir disfunção hepatocitária, que podem afetar o metabolismo energético e que o fator de ativação plaquetária (PAF) seria um importante agente causador de hepatotoxicidade. Para além destas investigações in vivo e bioquímicas, utilizaremos técnicas de acoplamento molecular que serão feitas no nosso laboratório e dinâmica molecular, estas serão feitas na BioSIM (Universidade do Porto) para investigar a capacidade das nitrosaminas como potencial inibidor não selectivo das enzimas LPCAT e PAF-AH. Uma vez que a nitrosamina é um composto comum produzido em ambientes aquáticos, também realizaremos ensaio de CL50 dos compostos e monitoração de modificações hematológicas e histológicas hepáticas induzidas por ambos os compostos no peixe Danio rerio.. , Situação: Em andamento; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Isabelly Annunciato - Integrante / Marcos Hikari Toyama - Coordenador / Sergio F. Sousa - Integrante., Financiador(es): Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - Bolsa.

• 2021 - Atual

  Atividade enzimática da fosfolipase A2 de zebrafish como biomarcador de qualidade da água, Projeto certificado pelo(a) coordenador(a) Bruno Paes De Carli em 08/07/2021., Descrição: As fosfolipases A2 (PLA2) são uma grande família de enzimas que tem como função hidrolisar a ligação fosfodiéster sn2 dos fosfolipídios e liberar ácidos graxos, dando ênfase aos ácidos graxos insaturados de 18 a 20 carbonos (PUFAs, w-3 e w-6) e ao ácido araquidônico (C20:4 w-6), cuja metabolização subsequente pela ciclo-oxigenase 2 (COX-2) gera lipídeos bioativos pró-inflamatórios e homeostáticos. Dentro do contexto atual, com a pandemia causada por Covid-19, evidenciou-se um aumento da concentração de fármacos utilizados no tratamento precoce da doença (ivermectina e cloroquina) na água de rios e lagos. A situação se agrava diante de uma epidemia de dengue e Chikungunya que vem se intensificando país, tornando-se necessária a nebulização com organofosforados (malathion) de forma recorrente. As PLA2s tem a função de atuar como ponte de ligação entre hormônios, estímulos inflamatórios e sinais de estresse fisiológico que contam com a mobilização do ácido araquidônico para mediar respostas adaptativas e fisiológicas. Assim, neste projeto pretendemos investigar a presença e função das enzimas fosfolipases A2 em zebrafish, assim como sua modulação em presença de agentes xenobióticos presentes em água doce. Então, este projeto será dividido em duas partes, a primeira será focada na atividade fosfolipásica A2, onde desenvolveremos um método simples de avaliação geral e específica para PLA2 usando técnicas colorimétricas. Além disso, construiremos um modelo in sílico da cPLA2 de zebrafish para avaliar, por meio de modelagem molecular, a interação de compostos com a cPLA2 de peixes e o efeito dos compostos xenobióticos: cloroquina, ivermectina e malathion sobre a atividade enzimática da PLA2 de Danio rerio. , Situação: Em andamento; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Graduação: (1) . , Integrantes: Isabelly Annunciato - Integrante / BRUNO PAES DE CARLI - Coordenador., Financiador(es): Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - Bolsa.

• 2018 - 2019

  Caracterização da atividade enzimática da fosfolipase A2 em Zebrafish (Danio rerio), Projeto certificado pelo(a) coordenador(a) Bruno Paes De Carli em 27/07/2020., Descrição: O projeto de pesquisa teve como intuito determinar da atividade enzimática da fosfolipase A2 em Zebrafish (Danio rerio).. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Graduação: (1) . , Integrantes: Isabelly Annunciato - Integrante / BRUNO PAES DE CARLI - Coordenador., Financiador(es): Universidade Paulista - Bolsa.