Luiz Tulio Teixeira Mota

Formação complementar

Idiomas

Produções bibliográficas

• MARQUES, L. M. ; RODRIGUES, L. P. ; MOTA, L. T. T. ; GAUDENCIO NETO, S. ; MARTINS, L. T. ; SIMIANO, K. C. . Avaliação da expressão do anticorpo monoclonal Rituximabe mediante diferentes peptídeos sinais em células humanas. In: XXIV - ENCONTRO DE INICIAÇÃO À PESQUISA, 2018, Fortaleza. Anais dos Encontros Científicos 2018, 2018.. In: XXIV ENCONTRO DE INICIAÇÃO À PESQUISA da UNIFOR, 2018. Anais do XXIV ENCONTRO DE INICIAÇÃO À PESQUISA da UNIFOR, 2018.

Projetos de pesquisa

• 2017 - Atual

  Avaliação da expressão gênica mediada pelo promotor da beta-caseína caprina em células epiteliais da glândula mamária caprina transgênicas com integração nos loci ROSA26, AASV1e M-S., Descrição: A produção de proteínas recombinantes utilizando organismos vivos, desde procariotos a eucariotos superiores, além da elevada relevância científica, movimenta um mercado econômico de alcance mundial. Proteínas mais complexas, que exigem modificações pós-traducionais essenciais ao seu funcionamento, necessitam de sistemas de produção mais evoluídos, sendo preferencialmente utilizadas plataformas derivadas de mamíferos. A produção de animais transgênicos é um método favorável para a produção de biofármacos na glândula mamária, pois possibilita a incorporação de modificações pós-traducionais complexas da proteína-alvo iguais ou muito semelhantes às realizadas por humanos com baixo custo de escalonamento da produção. Entretanto, uma das maiores limitações decorre da imprevisibilidade dos níveis de expressão do transgene, que em geral é integrado ao genoma hospedeiro de modo randômico, o que pode resultar em baixos níveis de produção da proteína recombinante ou até mesmo seu silenciamento devido ao locus cromossômico no qual o transgene é inserido. O objetivo desta proposta é avaliar o nível de expressão de uma proteína recombinante regulada por um promotor específico da glândula mamária em células epiteliais da glândula mamária caprina através da integração de seu transgene em três loci considerados seguros para albergar a construção de DNA exógena. Para tanto, serão construídos três vetores de gene-targeting para os loci ROSA26, AAVS1 e M-S contendo o gene da proteína verde fluorescente (GFP) sob a regulação do promotor da beta-caseína caprina. Quebras de dupla-fita do DNA específicas em cada um dos loci, visando aumentar a taxa de integração sítio-dirigida do transgene, serão geradas através da co-transfecção do sistema CRISPR/Cas9 com o vetor para recombinação homóloga em células da glândula mamária caprina. Colônias de células transgênicas serão selecionadas através de resistência a antibiótico conferida pelo vetor. Células carregando integrações mono e bialélicas nos loci ROSA26, AAVS1 e M-S serão selecionadas para a expressão in vitro de GFP através da estimulação no meio de cultura com fatores lactogênicos, e o nível de GFP será estimado através de western blot e citometria de fluxo. A metilação específica da região promotora também será comparada em células com integrações nos três diferentes loci. Desta forma, espera-se avaliar os efeitos da integração de transgene em três regiões específicas no genoma caprino sobre a expressão da proteína recombinante. Os resultados deste projeto contribuirão para a produção de animais transgênicos com maior eficiência e garantias de adequados níveis de produção da proteína recombinante, visto que o emprego desta plataforma para a produção de biofármarcos é de crescente relevância em nível mundial. Edital CNPq Universal 2016.. , Situação: Em andamento; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Graduação: (1) / Doutorado: (2) . , Integrantes: Luiz Tulio Teixeira Mota - Integrante / Louhanna Pinheiro Rodrigues - Integrante / Saul Gaudencio Neto - Integrante / Leonardo Tondello Martins - Integrante / Kaio César Simiano - Coordenador / Francisco Eder de Moura Lopes - Integrante / Pietro Martin Danziato - Integrante., Financiador(es): Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - Auxílio financeiro.