Flávia de Figueiredo Ribeiro

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• 2014 - 2016

  Triagem de mutações no gene FOXC2 em uma família com a síndrome linfedema-distiquíase, Descrição: RESUMO Neel e Schull em 1954 e Falls e Kertesz em 1964 descreveram a Síndrome Linfedema-Distiquíase (LD). Linfedema se caracteriza por distúrbios do sistema linfático que causam edemas em variadas regiões do corpo; e distiquíase, pelo nascimento de fileiras extra de cílios oculares juntamente à glândula Meibomiana ou na pálpebra superior. Posteriormente, observou-se que a LD também pode surgir associada a outros sintomas como fenda palatina, problemas cardíacos e oculares. A doença é monogênica, com um padrão de herança autossômica dominante, causada por mutações no gene Forkhead Box Protein C2 (FOXC2). No presente estudo, foi feita a triagem de mutações no gene FOXC2 em uma família com diagnóstico de LD oriunda do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Minas Gerais. Está família é composta por um casal jovem e não consanguíneo, sua primeira filha, duas tias maternas e a avó materna. A filha apresenta, principalmente, distiquíase e edema leve em planta dos pés bilateralmente. O pai é normal e a mãe apresenta edema intermitente de pernas desde os 12 anos de idade e, também, tripla fileira de cílios (triquíase). Além disso, duas tias do lado materno também apresentam edema intermitente de pernas e pés e distiquíase, e a avó materna, apresenta apenas distiquíase. A família aceitou participar da pesquisa, assinando um Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Após essa etapa, sangue periférico foi coletado e o DNA foi extraído. Cinco conjuntos de primers foram desenhados tendo como objetivo cobrir todo o gene FOXC2 e sua região promotora, realizou-se PCR e os amplicons foram sequenciados, através do sequenciamento de Sanger. Posteriormente, com o objetivo de obter uma maior qualidade e aumentar a cobertura do sequenciamento, dois conjuntos de primers foram clonados através do TOPO TA Cloning Kit e sequenciados. Duas mutações foram observadas, ambas na região promotora, sendo uma delas, um polimorfismo conhecido com a substituição de uma citosina por uma timina na posição -512 (c.-512C>T) e a outra mutação é composta pela mesma substituição, porém na posição -150. Estas mutações geram uma alteração nos sítios de ligação do gene de fatores de transcrição ao promotor do gene, podendo levar a uma superexpressão do FOXC2. E, por estarem em trans, os dois alelos podem estar superexpressos aumentando ainda mais a superexpressão do gene.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Mestrado acadêmico: (1) Doutorado: (1) . , Integrantes: Flávia de Figueiredo Ribeiro - Coordenador / Maria Raquel Santos Carvalho - Integrante.

• 2013 - 2013

  Avaliação histomorfométrica comparativa do processo cicatricial de feridas cutâneas diabéticas isquêmicas utilizando modelos experimentais de resistência à insulina induzida por dietas hipercalóricas., Descrição: A úlcera de pé diabético (UPD), uma complicação grave da Diabetes Mellitus (DM), é a principal causa de amputações em pacientes diabéticos e está relacionada com a elevada taxa de mortalidade, especialmente quando associada à doença arterial periférica. Recentemente, Barcelos e colaboradores (2009), estabeleceram um modelo pré-clínico de UPD isquêmico em DM tipo 1 induzida por estreptozotocina (STZ) em camundongos, no entanto, não há dados disponíveis até o momento em DM tipo 2 (DM2). O objetivo deste estudo foi avaliar, por histomorfometria, feridas cutâneas isquêmicas em camundongos com DM2, comparando os efeitos de dietas com alto teor de gordura (HL) e carboidrato refinado (HG) sobre a epitelização, a contração, a área ocupada pelo tecido de granulação e a área de cicatriz das feridas isquêmicas. C57BL/6 machos com 8 semanas de idade foram divididos em cinco grupos que receberam três diferentes dietas diabetogênicas, durante 12 semanas. O grupo HG recebeu a dieta HG e os grupos HL40 e HL60 receberam a dieta HL com 40% e 60% de lipídios, respectivamente. Grupos controle e STZ receberam dieta regular. A cirurgia consistiu de isquemia bilateral dos membros posteriores induzida por oclusão permanente das artérias femorais. Na mesma ocasião, feridas excisionais foram criadas na pele dorsal da coxa de ambos os membros utilizando um punch de biópsia com 5 mm de diâmetro. A alimentação com a dieta continuou até o momento da eutanásia. Os animais foram eutanasiados em diferentes períodos de tempo pós-cirúrgicos e as feridas coletadas para histologia (n= 5-7 animais/grupo). O teste de tolerância à glicose nos grupos HG, HL 40 e HL 60 demosntrou um perfil de resistência a insulina. Nos dias 3 e 7 após a cirurgia, foram analisados o padrão de epitelização e contração das feridas, sendo apresentada redução do comprimento da língua epitelial no 3 dia nos grupos HG (p<0,05) e HL 40 (p<0,05) e em todos os grupos no 7 dia (p<0,05 para STZ, HG e HL60 e p<0,01 para HL40) quando comparados ao contole, bem como aumento do gap entre folículos pilosos no 3 dia no grupo HL40 (p<0,05). No 14 dia após a cirurgia, foi analisada a área da cicatriz, sendo possível identificar um aumento significativo desta nos grupos STZ (p<0,05) e HL60 (p<0,01) quando comparados ao grupo controle. Dessa maneira, os nossos dados sugerem que a epitelização de feridas isquêmicas em camundongos é atrasada tanto na DM1 quanto na DM2 induzida por dietas hipercalóricas. Além disso, observa-se acentuada redução na capacidade de contração das feridas dos animais portadores de DM2 induzida por dietas hipercalóricas, mas não de DM1.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Graduação: (1) / Especialização: (0) / Mestrado acadêmico: (1) / Mestrado profissional: (0) / Doutorado: (1) . , Integrantes: Flávia de Figueiredo Ribeiro - Integrante / Leandro Ceotto Freitas Lima - Integrante / Lucíola da Silva Barcelos - Coordenador.

• 2012 - 2013

  Caracterização molecular de parasitos de malária aviária em uma floresta tropical sazonal seca do estado de Minas Gerais, Descrição: As florestas tropicais sazonais secas, Matas Secas, exibem uma distribuição disjunta, espalhadas pela região Neotropical. Os maiores remanescentes de Matas Secas são encontrados na América do Sul, especificamente no Brasil, onde representam cerca de 3,21% de todo seu território. As Matas Secas brasileiras encontram-se ameaçadas devido à ocupação humana, conversão de suas áreas para agricultura e altas taxas de desmatamento em seus solos férteis sendo, portanto, um dos ecossistemas mais ameaçados do Brasil. Apesar disso, pouco se sabe a respeito da diversidade dos hemosporídeos aviários nessa fitofisionomia. Nesse contexto, esse trabalho teve como objetivo detectar a prevalência e a diversidade genética de hemosporídeos causadores da malária aviária em uma floresta tropical sazonal seca no estado de Minas Gerais, com uso de marcadores moleculares. De 2007 a 2012 as aves do Parque Estadual da Mata Seca em Montes Claros foram capturadas com redes de neblina nas estações seca e chuvosa de cada ano. O sangue foi coletado em tubos microcapilares, após punção venosa da veia braquial e armazenado em álcool absoluto até a extração de DNA. A presença de Plasmodium e/ou Haemoproteus foi detectada nas 944 amostras de aves obtidas por meio do diagnóstico molecular utilizando-se os primers 343F e 496R. Aproximadamente 20% (188 amostras positivas) das aves estavam infectadas com parasitos. Em seguida, foi feita a amplificação por nested-PCR do gene citocromo-b do mtDNA dos hemosporídeos em 45 aves utilizando-se os primers HaemNF1 e HaemNR3, na primeira amplificação, e os primers HaemF e HaemR2 na segunda amplificação. Dez linhagens de hemosporídeos foram detectadas, sendo oito linhagens de Plasmodium e duas de Haemoproteus. Uma nova linhagem de Plasmodium foi detectada. A linhagem de Haemoproteus identificada no presente trabalho foi previamente identificada na Ilha Socorro (no México). As demais amostras positivas estão sendo sequenciadas para posterior análise filogenética dos hemosporídeos aviários.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Graduação: (1) / Doutorado: (3) . , Integrantes: Flávia de Figueiredo Ribeiro - Coordenador / Érika Martins Braga - Integrante / Patrícia Abreu Moreira - Integrante / Lemuel Leite - Integrante.