Juliano Leonel Gonçalves

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Produções bibliográficas

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• GONÇALVES, J. L. ; BRAGA, P. A. C. ; BARREIRO, J. R. ; TOMAZI, T. ; FERREIRA, C. R. ; ASSIS, D. M. ; ARAUJO JUNIOR, J. P. ; EBERLIN, M. N. ; SANTOS, M. V. . Comparison of direct analysis of bacterial colony versus extraction for identification of subclinical cow mastitis pathogens by MALDI/TOF-MS. In: Congresso Latinoamericano de Microbiologia (XXI ALAM), 2012, Santos. Congresso Latinoamericano de Microbiologia - XXI ALAM 2012, 2012.

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• GONÇALVES, J. L. . Chronic subclinical mastitis pathogens change cow level milk yield and components. 2019. (Apresentação de Trabalho/Congresso).

• GONÇALVES, J.L. . O impacto econômico da mastite bovina. 2019. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J.L. . Mastite em vaca de leite: um problema recorrente nas criações. 2018. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J. L. . Chronic subclinical mastitis reduces milk yield: an evaluation using multiple versus single quarter milk samples. 2018. (Apresentação de Trabalho/Congresso).

• GONÇALVES, J.L. . Impacto econômico da mastite. 2018. (Apresentação de Trabalho/Simpósio).

• GONÇALVES, J.L. . O impacto da mastite subclínica sobre o desempenho econômico de rebanhos leiteiros. 2018. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J.L. ; VARZONE, J. R. M. . Mastite e Qualidade do leite. 2017. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J. L. . Prejuízos associados à mastite bovina. 2017. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J. L. . Os efeitos da mastite sobre a produção e a composição do leite. 2017. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J. L. . Partnership building workshop. 2017. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J.L. . Efeito da mastite subclínica na produção e na qualidade do leite. 2016. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J.L. ; KAMIMURA, E. S. . Uso da contagem diferencial de leucócitos para diagnóstico da mastite bovina subclínica. 2016. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J. L. . Como estimar os prejuízos causados pela mastite?. 2016. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J.L. . Mastite e Qualidade do Leite. 2014. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J. L. . Produção e qualidade do leite em propriedades Rurais. 2013. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J. L. ; KAMIMURA, E. S. . Produção e qualidade do leite em propriedades Rurais. 2013. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J. L. ; KAMIMURA, E. S. . Qualidade do leite. 2013. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J. L. . Qualidade do leite em laticínios. 2013. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J. L. . Produção e composição do leite de vacas com mastite causada por Corynebacterium spp.. 2012. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J.L. . Físico-química do leite. 2012. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J. L. . Produzindo leite com qualidade e rentabilidade. 2011. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

• GONÇALVES, J. L. . Qualidade do leite. 2011. (Apresentação de Trabalho/Conferência ou palestra).

Outras produções

Projetos de pesquisa

• 2018 - 2019

  Orientação do aluno de IC- Carlos Fidelis: Tipagem de isolados de Prototheca spp. causadores de mastite bovina por MALDI-TOF MS, Descrição: Os objetivos deste estudo foram: (1) incluir entradas de P. zopfii genótipo 1, P. zopfii genótipo 2 e P. blaschkeae na base de dados do Biotyper MALDI; e (2) identificar em nível de espécie, isolados selvagens de Prototheca causadores de mastite bovina, utilizando a técnica de espectrometria de massas MALDI-TOF. Isolados de Prototheca spp. (n=31) provenientes de amostras de leite de vacas foram identificados por MC com base na morfologia por microscopia ótica. Estes isolados selvagens e cepas (n=3) de Prototheca spp. identificadas por biologia molecular (P. zopfii genótipo 1, P. zopfii genótipo 2 e P. blaschkeae) foram submetidos ao protocolo de extração de proteínas ribossomais. Brevemente, uma alçada da colônia foi diluída em solução contendo 350L de etanol absoluto e 150L de água ultrapura, seguido de duas etapas de lavagem e centrifugação a 12000 rpm. O pellet resultante foi diluído em 50L de ácido fórmico (70%), e posteriormente adicionado 50L de acetonitrila. Em seguida, a amostra contendo beads de zircônio foi alocada em disruptor por 5 min a 4000 rpm. Após centrifugação, 1,5L do sobrenadante foi pipetado em duplicata nos spots da placa-MALDI, seguido de 1,5L de matriz HCCA. A obtenção dos espectros foi realizada via função manual pelo software FlexControl. Um total de >60 espectros de alta qualidade foram utilizados para construção das entradas das cepas padrões genotipadas. Após a obtenção dos espectros de P. zopfii G1, P. zopfii G2 e P. blaschkeae, foram adicionadas as entradas para a criação da biblioteca no banco de dados do MALDI Biotyper Compass Explorer. Logo após, os espectros obtidos dos isolados selvagens de Prototheca spp. foram analisados por meio do software MALDI Biotyper 4.1.7 de acordo com as especificações para identificação (escore > 2). De um total de 31 isolados de Prototheca spp., 27 foram identificados como P. zopfii genótipo 2 (87,1%) e 4 como P. blaschkeae (12,9%). Dos 27 isolados identificados como P. zopfii genótipo 2, 22 isolados apresentaram identificação em nível de espécie (escore 2,0). Apenas 5 isolados de P. zopfii genótipo 2 apresentaram escore 1.7, o que sugere identificação em nível de gênero. Dos 4 isolados identificados como P. blaschkeae, 3 apresentaram escore de identificação 2,0, e apenas um isolado apresentou escore 1,7. Estes resultados sugerem que, mesmo com universo amostral reduzido, P. zopfii genótipo 2 foi a espécie causadora de mastite mais frequentemente isolada, seguido de P. blaschkeae, como descrito por Ahrholdt et al., (2012). Não houve isolamento de P. zopfii genótipo 1, o que corrobora com resultados obtidos de estudos prévios, em que foi descrito menor frequência de isolamento dessa espécie como causa de mastite. Por fim, ressalta-se que a técnica MALDI-TOF MS inicialmente foi desenvolvida para identificação de bactérias, o que limitou a aplicação da mesma para identificação de Prototheca spp., em razão da necessidade de otimização de protocolos de extração de proteínas ribossomais para a obtenção dos resultados do presente estudo. A inclusão de entradas de P. zopfii G1, P. zopfii G2 e P. blaschkeae na base de dados do Biotyper possibilitou a identificação de espécies selvagens de Prototheca causadoras de mastite pela MALDI-TOF MS. P. zopfii genótipo 2 foi a espécie causadora de mastite mais frequente dentre os isolados caracterizados pela MALDI-TOF MS. Por fim, há necessidade de novos estudos para avaliar a repetibilidade do atual protocolo de extração em rotina laboratorial.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Graduação: (1) . , Integrantes: Juliano Leonel Gonçalves - Coordenador / Carlos E. Fidelis - Integrante.

• 2018 - Atual

  Orientação da aluna de IC-Manoela Franke: Avaliação de protocolos cultura-independentes para identificação de Staph. aureus causador de mastite subclínica por MALDI-TOF MS, Descrição: O estudo objetivou a avaliação de quatro protocolos cultura-independentes (direto do leite) para identificação de Staphylococcus aureus causador de mastite subclínica por MALDI-TOF MS. Amostra composta de leite oriunda de caso de mastite subclínica (CCS > 200103 cels/mL) e cultura positiva para Staph. aureus (CBT > 10 UFC/mL) foi selecionada para a avaliação de protocolos de identificação por MALDI-TOF MS. Quatro protocolos foram avaliados utilizando: (i) beads de zircônia+TE; (ii) beads de granada+TE; (iii) beads de zircônia+PBS; (iv) beads de granada+PBS. Brevemente, 400 L de leite foram centrifugados por 1 min à 13000 rpm (igual para as demais etapas). O pellet foi ressuspendido em 200 L de TE ou PBS e submetido a centrifugação. Após, o pellet foi lavado com 100 L de TE ou PBS e transferido para microtubo contendo 30 mg de beads de zircônia ou granada. Em seguida, o microtubo foi alocado em disruptor para extração das proteínas ribossomais bacterianas por 10 min à 4000 rpm. Por fim, após 1 h de decantação, 1 L do extrato (sobrenadante) foi aplicado no spot da placa MALDI-TOF seguido da aplicação de 1 L ácido fórmico 70% e 1 L de matriz HCCA. A leitura da placa foi realizada de acordo com as especificações para identificação (escore > 2) como descrito por Barcelos et al. (2019) e o processamento por meio do software MALDI Biotyper 4.1.70 (biblioteca MBT versão 7311 MPS). RESULTADOS PARCIAIS: Não foi possível obter espectros via Flexcontrol 3.4 usando a função automática. Portanto, os espectros foram obtidos por função manual. Apenas os protocolos contendo beads de granada ou zircônio associada a lavagem com PBS apresentaram escore >2. A MALDI-TOF MS associada ao protocolo por beads e PBS possibilita a identificação de Staph. aureus direto de amostras de leite. Portanto, comparado a metodologia convencional, é possível a obtenção de diagnóstico rápido (após 4 h) e confiável (escore >2), sem a necessidade de cultura microbiológica. Os próximos ensaios terão como objetivo a avaliação da repetibilidade dos protocolos em ampla escala laboratorial.. , Situação: Em andamento; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Graduação: (1) . , Integrantes: Juliano Leonel Gonçalves - Coordenador / Manoela Franke - Integrante.

• 2018 - Atual

  Orientação da aluna de IC-Letícia Cassano: Caracterização da diversidade de Staphylococcus não-aureus por MALDI-TOF MS, Descrição: Os objetivos deste estudo foram determinar a frequência de cepas de Staphylococcus não-aureus (SNA) causadoras de mastite subclínica e avaliar a caracterização da diversidade de SNA por MALDI-TOF MS. Isolados de SNA (n=152) de dois rebanhos foram identificados por MALDI-TOF MS. Brevemente, os isolados foram estriados em ágar sangue e incubados a 37C por 24 h. Em seguida, uma colônia da bactéria foi aplicada no spot da placa de MALDI-TOF, seguido da aplicação de 1 L de ácido fórmico (70%). Após a secagem, aplicou-se 1 L de matriz, deixando-se secar à temperatura ambiente. A leitura da placa foi realizada de acordo com as especificações para identificação (escore > 2) de extração de proteínas (Barcelos et al., 2019) e o processamento por meio do software MALDI Biotyper 4.1.70 (biblioteca MBT versão 7311 MPS). Os dendogramas foram gerados no MALDI Biotyper Compass Explorer pela função ?PCA view dendogram? adotando parâmetros padrões e 80% de ?distance level? para interpretação de cepas clonais. RESULTADOS PARCIAIS: Um total de 139 isolados foram identificados como S. chromogenes (91,5%), 8 S. simulans (5,3%), 2 S. hyicus (1,3%), 1 S. hominis (0,7%), 1 S. haemolyticus (0,7%) e 1 S. epidermidis (0,7%). Foram encontrados 10 perfis proteicos de S. chromogenes entre os dois rebanhos avaliados. A espécie de Staphylococcus não-aureus causadora de mastite mais frequentemente isolada é S. chromogenes. Os isolados de S. chromogenes apresentaram picos de massa que permitiram diferenciá-los em 10 diferentes perfis proteicos intraespécie.. , Situação: Em andamento; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Graduação: (1) . , Integrantes: Juliano Leonel Gonçalves - Coordenador / Letícia C. R. de Abreu - Integrante.

• 2017 - Atual

  Projeto de Postdoc: Como a terapia seletiva de secagem afeta o risco de mastite e a diversidade bacteriana do leite em vacas leiteiras?, Descrição: O presente estudo tem como hipótese geral que a terapia seletiva de secagem (TSS) permite a redução do uso de antibióticos na secagem, sem aumentar o risco de novas infecções intramamária (NIIM) e a contagem de células somáticas (CCS) no pós-parto, e sem alterar a diversidade bacteriana do leite. Assim, os objetivos do presente estudo serão avaliar o efeito da TSS (uso somente de selante de tetos em vacas sadias no momento da secagem) sobre: (i) a diversidade bacteriana do leite, e (ii) o risco de NIIM no pós-parto. Será selecionado um rebanho leiteiro da região de Araras-SP, com aproximadamente 2000 vacas em lactação. O projeto será realizado por meio de dois subprojetos. Para o subprojeto 1, as vacas serão distribuídas aleatoriamente em dois grupos experimentais no momento da secagem: a) vacas sadias (com quatro quartos sem isolamento de agentes causadores de mastite), as quais serão tratadas somente com selante interno de tetos na secagem (estimativa, n=60); b) vacas com mastite (cultura-positiva em pelo menos um dos quartos), as quais serão tratadas com selante de tetos + tratamento de vaca seca (estimativa, n=60). Serão coletadas amostras estéreis de leite em nível de quartos mamários no dia da secagem e entre 7-15 d pós-parto (n lactação < 3 e DEL < 450). As amostras de leite serão submetidas à identificação de agentes causadores de infecção intramamária (IIM) por cultura microbiológica (CM) associada com MALDI-TOF MS. Um total de 120 amostras de leite serão submetidas ao protocolo de extração do DNA bacteriano. O DNA será amplificado com os oligonucleotídeos iniciadores da região V4 do gene 16S rRNA. O sequenciamento de nova geração (SNG) será realizado por meio do equipamento MiSeq (Illumina). As análises estatísticas referentes a diversidade bacteriana serão feitas usando o R com os pacotes phyloseq 1.22.3 e vegan 2.5-3. Para o subprojeto 2, será utilizado um banco de dados contendo informações do rebanho (produção de leite dos primeiros 100 dias, CCS, casos de mastite clínica e resultados da cultura; de ambas lactações, antes e após o parto) de 1500 vacas (n lactação >1 e 4 e DEL 450) submetidas a TSS entre os anos de 2018 e 2019 (vacas sadias: uso de selante de tetos, n = 230; vacas com mastite: selante+tratamento de vaca seca; n = 1170). O efeito da TSS sob risco de NIMI será analisado com a inclusão do rebanho e da vaca como efeitos aleatórios. Espera-se com o subprojeto 1, compreender a dinâmica da microbiota mamária que ajudará a elucidar os resultados falso-negativos da cultura microbiológica, como exemplo, grupos de bactérias causadoras de mastite que ainda são desconhecidos, e gêneros bacterianos benéficos e/ou comensais que possivelmente fazem parte do microbioma do leite. Adicionalmente, o estudo da eficácia da TSS permitirá elucidar a viabilidade de implementação de programas que tenham o intuito de reduzir o uso de AI em vacas leiteiras. O uso não-responsável de antibióticos em quartos mamários sadios pode afetar parte do microbioma ?benéfico?, e ainda favorecer o aumento da resistência aos antimicrobianos. Espera-se com o subprojeto 2, avaliar o efeito da TSS sobre o risco de NIIM, o que pode embasar o uso desta ferramenta em rebanhos leiteiros para uso responsável de antibióticos em vacas leiteiras na secagem. Por fim, espera-se ainda com a presente proposta contribuir com a formação de recursos humanos em nível de pós-doutorado e graduação (2 orientações em nível de iniciação científica), e publicação de dois artigos em revista de alto impacto científico.. , Situação: Em andamento; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Juliano Leonel Gonçalves - Coordenador / Marcos Veiga dos Santos - Integrante / Nathalia Cristina Cirone Silva - Integrante / Jeniffer Ronholm - Integrante.

• 2015 - 2016

  Coorientou a aluna de Iniciacao cientifica Melina com o projeto intitulado Identificação de patógenos primários isolados de infecção intramamária subclínica pela técnica de Espectrometria de Massas por Ionização e Dessorção à Laser Assistida por Matriz, Descrição: A hipótese do presente estudo é a de que a técnica de Espectrometria de Massas por Ionização e Dessorção à Laser Assistida por Matriz (MALDI-TOF MS) identifica de forma eficaz os patógenos primários causadores de infecção intramamária (IIM) subclínica quando comparado à cultura microbiológica. O presente estudo terá como objetivo a identificação dos patógenos primários (Staphylococcus aureus, Streptococcus ambientais, Streptococcus agalactiae, Escherichia coli e Klebsiella spp.) causadores de IIM subclínica por meio da técnica de MALDI-TOF MS. Para isso, serão selecionados seis rebanhos leiteiros (aproximadamente 600 vacas), nos quais serão selecionadas vacas em lactação (estimativa de 330 animais) com IIM subclínica causada por patógenos primários distribuídos em 5 grupos (1: Staphylococcus aureus; 2: Streptococcus ambientais; 3: Streptococcus agalactiae; 4: Escherichia coli; e 5: Klebsiella spp.). Das vacas envolvidas no estudo, serão selecionados 150 quartos mamários diagnosticados com IIM causada por patógenos primários. Além disso, será realizada uma segunda coleta de leite dos quartos mamários, os quais serão submetidos a contagem de células somáticas e identificação por cultura microbiológica. Após a identificação pela cultura microbiológica, será realizada extração em tubo das proteínas ribossomais dos isolados selecionados, para então, serem submetidos a leitura dos perfis proteicos (fingerprint) e identificação em nível de espécie bacteriana pela técnica de MALDI-TOF MS. Os resultados das duas técnicas serão comparados por meio do teste McNemar de proporções pareadas utilizando o programa estatístico S.A.S versão 9.2. Espera-se com o presente estudo, mostrar que a MALDI-TOF MS pode ser adotada como uma técnica laboratorial rotineira na identificação de patógenos causadores de mastite bovina. A MALDI-TOF MS proporcionará identificação rápida dos patógenos causadores de mastite possibilitando resultados rápidos aos produtores rurais, o que evitará assim tratamentos inadequados e, consequentemente, resistência aos antimicrobianos.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Juliano Leonel Gonçalves - Coordenador / Marcos Veiga dos Santos - Integrante / Melina Melo Barcelos - Integrante.

• 2015 - 2016

  Coorientou a aluna de iniciacao cientifica Larissa com o projeto intitulado Produção e composição do leite em vacas com mastite subclínica causada por Streptococcus ambientais, Descrição: O objetivo do presente estudo será avaliar o efeito da mastite subclínica bovina causada por Streptococcus ambientais sobre a qualidade e a produção de leite em nível de quartos mamários, considerando a sua alta prevalência em rebanhos leiteiros e a ausência de medidas específicas de controle para estes agentes. Os objetivos específicos serão avaliar o efeito da mastite subclínica bovina causada por Streptococcus uberis, Streptococcus bovis e Streptococcus dysgalactiae sobre: a) contagem de células somáticas (CCS); b) as concentrações de gordura e proteína bruta; c) a produção de leite; e d) o preço do litro de leite. Serão selecionados seis rebanhos leiteiros (aproximadamente 600 vacas), nos quais serão selecionadas vacas em lactação (estimativa de 60) com mastite subclínica causada por Streptococcus ambientais (S. uberis, S. bovis e S. dysgalactiae). Serão coletadas amostras de leite de ordenha completa e individual de quartos mamários das vacas selecionadas, totalizando a amostragem de 240 quartos mamários, dos quais serão selecionadas aleatoriamente 12 vacas com isolamento positivo de cada agente, levando em conta o número e fase de lactação. Os isolados bacterianos serão identificados em nível de espécie por meio de cultura microbiológica convencional. As concentrações de gordura e proteína bruta serão analisadas por absorção infravermelha e a CCS será determinada por citometria de fluxo. Para determinar o efeito da mastite subclínica causada por Streptococcus ambientais sobre o preço do litro de leite (PLL), será utilizado o preço médio brasileiro baseado na média dos últimos 20 anos corrigidos pela inflação. Após, será agregado ao PLL quantia de acordo com o nível de CCS e teores de proteína bruta e gordura distribuídos em faixas de bonificação, neutralidade e penalização como se fosse um sistema de pagameto por qualidade do leite. Equações do PLL dos quartos mamários afetados por S. uberis, S. bovis e S. dysgalactiae serão determinadas por meio de regressão binária. Além disso, será realizado o procedimento DIF do SAS entre as médias de PLL atribuídos aos quartos mamários sadios e infectados para determinar o efeito da mastite subclínica causada por S. uberis, S. bovis e S. dysgalactiae em relação a programas de pagamento por qualidade do leite. Será avaliado o efeito da mastite subclínica causada por Streptococcus ambientais em nível de grupo e espécies por quartos mamários sobre a CCS, composição e produção de leite, utilizando a análise de variância por meio de delineamento em blocos ao acaso. Espera-se com a realização deste estudo, estimar o impacto da mastite subclínica bovina por Streptococcus ambientais em nível de quartos mamários sobre a qualidade e a produção de leite. Desta forma, este estudo poderá, também, servir de base para futuras pesquisas sobre estratégias de controle específicas para este agente, tais como a avaliação de eficácia e custo-benefício para tratamentos de mastite causada por Streptococcus ambientais.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Juliano Leonel Gonçalves - Coordenador / Marcos Veiga dos Santos - Integrante / Larissa Martins - Integrante.

• 2014 - 2016

  Auxiliou a mestranda Alessandra Modena Orsi com o trabalho intitulado Capacidade de formação de biofilme e resistência aos antimicrobianos de patógenos causadores de mastite bovina., Projeto certificado pelo(a) coordenador(a) Marcos Veiga dos Santos em 17/02/2015., Descrição: A produção de biofilme bacteriano é umas das principais causas de falhas no tratamento com antimicrobianos. Mastite é uma inflamação da glândula mamária causada principalmente por bactérias a qual pode se apresentar na forma subclínica e clínica. Staphylococcus aureus é um patógeno primário contagioso, causador de mastite crônica e resistente a tratamentos com antimicrobianos por fatores de virulência sendo um deles a capacidade de produção de biofilme. Streptococcus uberis é um patógeno primário de origem ambiental, com alta prevalência em rebanhos leiteiros e que também pode produzir biofilme. Os objetivos deste estudo serão avaliar a capacidade de formação de biofilme, resistência aos antimicrobianos e identificação em nível de sub espécie dos isolados de Staphylococcus aureus e Streptococcus. uberis.Serão utilizados 300 isolados de Staphylococcus aureus, 300 Streptococcus uberi,. provenientes de casos de mastite clínica e sub-clínica de 20 rebanhos comerciais localizados na região de Pirassununga- SP. Após o isolamento primário os isolados serão criopreservados em caldo BHI e armazenados á -86° até as analises. Para determinação da capacidade de formação de biofilme, cada isolado será inoculado em caldo TSB, incubado a 37°C 1 por 24 horas, e diluído até concentração a 108 células/mL (escala 0,5 de MacFarland).Alíquotas, em triplicatas serão transferidas para microplacas de poliestileno estéril com 96 poços de fundo chato, e incubadas em estufa bacteriológica à 37°C 24 horas. Após a incubação, as microplacas serão agitadas, fixadas e coradas com cristal violeta. Isolados de S. aureus e Strep.uberis, serão submetidos ao procedimento de genotipagem pela técnica de polimorfismo dos segmentos de DNA obtidos por amplificação randômica (RAPD-PCR) e ao teste de disco difusão de antibióticos em agar Mueller Hinton.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Mestrado acadêmico: (1) Doutorado: (1) . , Integrantes: Juliano Leonel Gonçalves - Integrante / Marcos Veiga dos Santos - Coordenador / Alessandra Módena Orsi - Integrante.

• 2014 - 2016

  Auxiliou a mestranda Renata de Freitas Leite. Projeto intitulado: Concentração inibitória mínima de extratos brutos produzidos por actinobactérias para agentes causadores de mastite bovina, Descrição: O uso imprudente de antibióticos para o tratamento da mastite bovina pode levar ao aumento da resistência bacteriana e ao comprometimento da eficácia dos tratamentos atuais. Desta maneira, novas alternativas para o tratamento da mastite devem ser procuradas. As actinobactérias são capazes de produzir extratos brutos que contêm metabólitos secundários ativos, que inibem o crescimento de outras bactérias. Portanto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a concentração inibitória mínima (CIM) de extratos brutos de actinobactérias para isolados de Staphylococcus aureus, Staphylococcus chromogenes, Streptococcus dysgalactiae e Streptococcus uberis, provenientes de 23 rebanhos leiteiros. Estes isolados foram identificados pela cultura microbiológica e por espectrometria de massas. Assim, foi realizada uma triagem, pelo bioensaio colorimétrico, de 15 extratos brutos, previamente testados e identificados, provenientes de actinobatérias isoladas de diferentes ambientes e plantas (caatinga, áreas de reflorestamento e do eucalipto) para 10 isolados de cada espécie causadora de mastite. Em seguida, os extratos Caat 1-54 e Caat P5-8 foram selecionados para determinação da CIM, a 50% (CIM50) e a 90% (CIM90). Para determinar a CIM dos extratos brutos, foram utilizados 20 isolados de cada espécie, totalizando 80 isolados. Foi utilizada a análise de sobrevivência para avaliação dos resultados. O extrato Caat 1-54 apresentou os menores valores de CIM50 e CIM90 para S. aureus (0,39 g/mL e 6,25 g/mL, respectivamente) e S. chromogenes (CIM50 = CIM90 = 0,78 g/mL). O ceftiofur apresentou os menores valores de CIM tanto para Strep. dysgalactiae (CIM50 0,048 g/mL; CIM90 = 100 g/mL), como para Strep. uberis (CIM50 0,19 g/mL; CIM90 = 0,39 g/mL). Seguido do ceftiofur, o extrato Caat 1-54 foi o que apresentou menores valores CIM, com apenas uma diluição seriada de diferença entre as CIM50 das duas espécies (1,56 e 0,78 g/mL para Strep. dysgalactiae e Strep. uberis, respectivamente). O extrato Caat P5-8 apresentou os maiores valores de CIM50 e CIM90 para todas as espécies estudadas (CIM 25 g/mL). Os resultados obtidos indicam o potencial dos extratos brutos provenientes de actinobactérias para o tratamento da mastite bovina causada por S. aureus, S. chromogenes, Strep. dysgalactiae e Strep. uberis. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Mestrado acadêmico: (1) Doutorado: (1) . , Integrantes: Juliano Leonel Gonçalves - Integrante / Marcos Veiga dos Santos - Coordenador / Renata de Freitas Leite - Integrante.

• 2013 - 2018

  Auxiliou o doutorando Tiago Tomazi no projeto intitulado: Perfil de agentes etiológicos causadores de mastite clínica e uso de antimicrobianos em rebanhos leiteiros, Descrição: A mastite bovina é considerada um problema de ordem global devido à alta prevalência e por ser a doença que mais causa prejuízos na bovinocultura leiteira (Halasa et al., 2007). De acordo com Vianni e Lázaro (2003), o monitoramento em propriedades leiteiras da mastite clínica é importante devido aos prejuízos associados com: descarte precoce de animais, gastos com medicamentos, redução na produção e descarte de leite, além do risco de morte da vaca. Adicionalmente, o leite proveniente de vacas com mastite clínica apresenta alteração das características físicas, químicas, microbiológicas e sensoriais, o que o torna impróprio ao consumo. Além disso, a alteração da qualidade do leite reduz o rendimento industrial e o tempo de prateleira dos produtos lácteos (Barbano e Santos, 2006). Objetivo geral do presente estudo será determinar o perfil etiológico e a sensibilidade aos antimicrobianos dos patógenos causadores de mastite clínica e descrever os aspectos qualitativos e quantitativos relacionados ao uso de antimicrobianos em rebanhos leiteiros. Além disso, o estudo tem como objetivo avaliar a eficiência de um programa de cultura microbiológica na fazenda (PCF) sobre o uso de antimicrobianos e avaliação econômica em relação a protocolos de tratamento da mastite clínica.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Juliano Leonel Gonçalves - Integrante / Marcos Veiga dos Santos - Integrante / Tiago Tomazi - Coordenador.

• 2013 - 2017

  Responsável pelo projeto. Título: Impacto da mastite subclínica sobre custo de produção e qualidade do leite em rebanhos leiteiros., Descrição: A hipótese do presente estudo é a de que a metodologia de ordenha completa e individual por quarto mamário permite estimar perdas de produção causadas por infecções intramamárias ocasionadas por patógenos primários. O projeto será realizado por meio de três experimentos, cujos objetivos gerais serão: 1) avaliar os efeitos das infecções intramamárias subclínicas causadas por patógenos primários sobre a contagem de células somáticas, produção e composição do leite de vacas em nível de quartos mamários; 2) avaliar as perdas de produção e alteração da composição do leite em nível de rebanho por meio da contagem de células somáticas; e 3) avaliar o impacto econômico da mastite subclínica causada por patógenos primários em rebanhos leiteiros. Espera-se com o presente estudo determinar os efeitos negativos da mastite subclínica sobre as variáveis estudadas em nível de quartos mamários e de rebanho com o intuito minimizar perdas, tanto a cadeia primária, como a indústria de derivados lácteos.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Juliano Leonel Gonçalves - Coordenador / Juliana R. Barreiro - Integrante / Marcos Veiga dos Santos - Integrante / Tiago Tomazi - Integrante / Cristian Marlon de Magalhães Rodrigues Martins - Integrante.

• 2012 - 2015

  Auxiliou no projeto: Detecção e Contagem de Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae em leite de tanque por PCR em tempo real., Descrição: O principal método de identificação dos agentes causadores de mastite é a cultura microbiológica, cujos resultados são baseados em características fenotípicas, provas bioquímicas e perfil enzimático dos isolados. O método da reação em cadeia pela polimerase em tempo real (RT-PCR) para identificação direta de patógenos no leite apresenta vantagens sobre a cultura microbiológica, como a possibilidade do uso de amostras conservadas, detecção, contagem e identificação de microrganismos não viáveis e rapidez de resultados. O objetivo deste estudo será avaliar a RT-PCR como método alternativo à cultura microbiológica, para contagem e detecção de S. aureus e S. agalactiae em vacas com infecção intramamária causada por estes agentes e avaliar a RT-PCR para estimar a prevalência (%) de mastite causada por S. aureus e S. agalactiae a partir de amostras de leite de tanque de expansão. O objetivo secundário do estudo será determinar a sensibilidade, a especificidade e a repetibilidade da técnica de RT-PCR para contagem de S. aureus e S. agalactiae em amostras de leite de vacas com mastite em amostras de leite compostas, de quartos mamários e de tanque, além de avaliar o efeito da contagem de S. aureus e S. agalactiae sobre a composição do leite (caseína, gordura, proteína, lactose, extrato seco total e extrato seco desengordurado) em amostras de leite compostas e de tanque. O experimento será realizado em quatro rebanhos comerciais com média de, aproximadamente, 50 vacas em lactação e que tenham histórico de mastite causada por S. aureus e S. agalactiae, ordenha mecanizada e tanque de expansão. Serão coletadas amostras de leite do tanque, compostas e por quarto mamário de todas as vacas em lactação dos rebanhos selecionados, durante 3 semanas consecutivas. As amostras de leite de tanque, compostas e de quartos mamários serão submetidas a contagem de S. aureus e S. agalactiae por cultura microbiológica e por RT-PCR. Os resultados de contagem de S. aureus e S. agalactiae serão utilizados para determinar a sensibilidade e a especificidade da RT-PCR para quantificar estes dois microrganismos em amostras de leite de tanque.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Juliano Leonel Gonçalves - Integrante / Juliana R. Barreiro - Integrante / Marcos Veiga dos Santos - Integrante / Aline Dibbern - Coordenador.

• 2011 - 2015

  Auxiliou no projeto da doutoranda Juliana Regina Barreiro. Título: Identificação de bactérias do leite por espectrometria de massas., Descrição: O objetivo deste estudo foi avaliar a técnica de espectrometria de massas por ionização/dessorção a laser assistida por matriz ? tempo-de-vôo (MALDI-TOF) para a identificação direta em amostras de leite (sem cultivo microbiológico) de bactérias causadoras de mastite. Para tanto foram realizados dois experimentos (1 e 2). No experimento 1, o objetivo foi determinar a sensibilidade diagnóstica da técnica MALDI-TOF MS para a identificação direta em amostras de leite de Staphylococcus aureus, Streptococcus uberis, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae e Escherichia coli. Foram realizadas contaminações experimentais de S. aureus, S. uberis, S. agalactiae, S. dysgalactiae e E. coli em amostras de leite, para a obtenção de contagens de 103 a 109 ufc/mL. As amostras de leite contaminadas foram processadas com o uso do kit Maldi Sepsityper (Bruker Daltonics) e submetidas ao protocolo de lise bacteriana para posterior análise por MALDI-TOF MS. Espectros de massas foram coletados na faixa de massas de 2.000-20.000 m/z e foram analisados pelo programa MALDI Biotyper 3.0 (Bruker Daltonics) com as configurações padrão para obtenção da identificação bacteriana. A identificação direta de patógenos causadores de mastite a partir de amostras de leite foi possível em contagem 106 ufc/mL para S. aureus, 107 ufc/mL para E. coli, e 108 ufc/mL para S. agalactiae, S. dysgalactiae e S. uberis. No experimento 2, o objetivo foi avaliar o efeito da pré-incubação de amostras de leite de quartos mamários com mastite subclínica sobre a eficácia da identificação sem cultivo de patógenos causadores de mastite por MALDI-TOF MS. Foram selecionados 2 rebanhos leiteiros para coletas de leite de quartos mamários de todas as vacas em lactação. As amostras de leite foram submetidas às análises de: a) cultura microbiológica; b) pré-incubação seguida de identificação por espectrometria de massas diretamente do leite; c) contagem bacteriana total (CBT). Para a realização da CBT, as amostras de leite foram submetidas à citometria de fluxo; e para a identificação direta de patógenos causadores de mastite a partir do leite, as amostras foram submetidas ao desnate por centrifugação (10.000 Xg por 10 minutos), e pré-incubação a 37°C por 12 horas. Posteriormente, as amostras foram processadas com o uso do kit Maldi Sepsityper (Bruker Daltonics) e submetidas ao protocolo de lise bacteriana para posterior análise por MALDI-TOF MS. Do total de 810 amostras de leite analisadas por cultura microbiológica (método referência), 347 apresentaram crescimento bacteriano, sendo 305 identificadas como agentes de interesse na identificação direta pelo método MALDI-TOF MS: Staphylococcus coagulase negativa (n=191), S. aureus (n=31), S. agalactiae (n=42), S. uberis (n=37), S. dysgalactiae (n= 4). Sendo assim, 305 amostras foram analisadas pelo método de idenfificação direta MALDI-TOF MS, a qual apresentou baixa sensibilidade quando comparado com a cultura microbiológica (método referência): Staphylococcus coagulase negativa (14,08%), S. agalactiae (15,25%), S. uberis (1,69%) S. aureus (6,12%) e S. dysgalactiae (0%). A pré-incubação de amostras de leite não aumentou a sensibilidade de identificação direta de microrganismos causadores de mastite pelo método MALDI-TOF MS.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Juliano Leonel Gonçalves - Integrante / Juliana R. Barreiro - Coordenador / Marcos Veiga dos Santos - Integrante / Christina Ramires Ferreira - Integrante / Marcos Nogueira Eberlin - Integrante.

• 2010 - 2012

  Responsável pelo projeto. Título: Produção e composição do leite bovino em vacas com mastite causada por Corynebacterium spp., Descrição: Os objetivos gerais do estudo foram avaliar o efeito de IIMs subclínicas causadas por Corynebacterium spp. sobre a composição e a produção de leite de quartos mamários bovinos e a eficácia de utilização da técnica de espectrometria de massas com ionização e dessorção a laser assistida por matriz (MALDI-TOF-MS) para identificação rápida de Corynebacterium spp. por meio do fingeprinting de proteínas bacterianas conservadas. Especificamente, objetivou-se determinar o efeito da IIM causada por Corynebacterium spp. sobre o teor de gordura, proteína bruta, lactose, caseína, sólidos totais, extrato seco desengordurado do leite e contagem de células somáticas (CCS).. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Mestrado acadêmico: (3) Doutorado: (3) . , Integrantes: Juliano Leonel Gonçalves - Coordenador / Juliana R. Barreiro - Integrante / Daniele C. Beuron - Integrante / Marcos Veiga dos Santos - Integrante / José Franchini Garcia Moreno - Integrante / Christina Ramires Ferreira - Integrante / Marcos Nogueira Eberlin - Integrante / Lucinéia Mestieri - Integrante / Tiago Tomazi - Integrante.

• 2010 - 2012

  Auxiliou no projeto do mestrando Tiago Tomazi. Título:Produção e composição do leite em vacas com mastite causada por Staphylococcus spp., Descrição: Os objetivos gerais deste projeto foram avaliar o efeito da mastite subclínica causada por ECN sobre a produção e composição do leite; e avaliar as técnicas de espectrometria de massas (MS) e PCR quantitativo para diferenciação de espécies de ECN. Foram usadas amostras coletadas de 30 vacas distribuídas em três fazendas comerciais localizadas no interior de São Paulo, próximas de Pirassununga. Após a identificação microbiológica das bactérias, as amostras foram analisadas pelas metodologias de espectrometria de massas e PCR quantitativo. Para avaliação do efeito da mastite por ECN sobre a produção e composição do leite foram consideradas as seguintes variáveis: a) produção por quarto mamário; b) composição do leite (gordura, proteína bruta, lactose, sólidos totais); contagem de células somáticas e composição proteica do leite (caseína, proteína do soro). Com a realização deste estudo, pode ser quantificado o efeito das IIM causadas por ECN em nível de quarto mamário. Buscou-se, também, avaliar a eficiência de métodos rápidos e sensíveis para a contagem e identificação das espécies de ECN, e o desenvolvimento de métodos alternativos para o diagnóstico da mastite subclínica causada por estes patógenos.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Juliano Leonel Gonçalves - Integrante / Juliana R. Barreiro - Integrante / Marcos Veiga dos Santos - Integrante / Marcos Nogueira Eberlin - Integrante / Tiago Tomazi - Coordenador.

• 2009 - 2011

  Auxiliou no projeto da mestranda Daniele Cristine Beruron. Título: Monitoramento e vigilância da resistência antimicrobiana em bactérias patogênicas para o gado de leite., Descrição: O projeto serviu de apoio à outras instituições ou órgãos na definição de políticas para redução dos riscos relacionados à disseminação de genes de resistência antimicrobiana na produção animal. Isso poderá trazer benefícios para a cadeia produtiva do leite, com reflexos na saúde do consumidor e na garantia da qualidade e segurança do leite e seus derivados. Os resultados obtidos contribuíram para melhora da qualidade e a segurança do leite, contribuindo no refinamento dos programas de controle da mastite, com redução da contagem de células somáticas e da presença de resíduos de antibióticos no leite. Isso complementou os esforços da Rede Brasileira de Laboratórios de Qualidade do Leite, coordenada pelo MAPA/SDA. Sendo assim, a padronização das metodologias de isolamento e identificação dos patógenos da mastite e dos testes de susceptibilidade aos antimicrobianos pode ser difundida para laboratórios das diversas regiões do País.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Juliano Leonel Gonçalves - Integrante / Daniele C. Beuron - Coordenador., Financiador(es): Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - Auxílio financeiro.

Prêmios