Anna Sofia Apovian de Borbon

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Projetos de pesquisa

• 2020 - 2021

  Pesquisa de Leishmania em diferentes amostras biológicas de espécies de gambás provenientes do estado do Rio de Janeiro., Descrição: A pesquisa foi realizada no município do Rio de Janeiro, na Clínica de Recuperação de Animais Selvagens (CRAS). As amostras foram coletadas de duas maneiras, com os gambás vivos e os que foram eutanasiados ou vieram a óbito. Os vivos foram clinicamente avaliados e se em boas condições, eram submetidos à anestesia pelo protocolo utilizado em mamíferos silvestres, a partir de uma associação de quetaminacom midazolam e de analgesia com morfina, podendo assim fazer a punção de medula e de sangue venoso. Com os animais recém mortos foi possível realizar a coleta intracardíaca e coletar um fragmento do baço. No total, foram obtidas 29 amostras de sangue, 18 de medula e 7 de baço. As amostras de sangue, medula e baço para PCR foram colocadas em microtubos com EDTA e congeladas a -20 até serem enviadas e analisadas pelo Laboratório de Biologia Molecular do Hospital Veterinário Roque Qualiato das FIO. Durante a coleta, também foram confeccionados esfregaços sanguíneos e squash de medula óssea, que foram corados com corante do tipo Romanowsky para a pesquisa de formas amastigotas do protozoário. A extração do DNA genômico foi feita por meio da técnica de acetato de amônio. Para assegurar a qualidade da extração, o gene gpdh, presente no genoma de mamíferos foi amplificado de todas as amostras de gambás. Posteriormente, foi realizada a nested-PCR para caracterização genética de Leishmania sp. a partir de gene ssu rRNA, utilizando os iniciadores R221 e R332 na reação primária e R223 e R333 na reação secundária, dando origem a um produto de 358pb, como previamente descrito por Albuquerque et al., 2017. As reações foram processadas em um termociclador (Applied Biosystems Veriti Thermal Cycler, Thermo Fisher Scientific) e a visualização do produto foi feita em eletroforese de gel de agarose 2%, com posterior fotodocumentação. Para assegurar a fidelidade do teste o gene gpdh (glyceraldehyde-3- phosphatedehydrogenase), presente no genoma de todos os mamíferos, foi testado concomitantemente, utilizando a técnica de precipitação por acetato de amônio.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Graduação: (2) . , Integrantes: Anna Sofia Apovian de Borbon - Coordenador / Beatriz Claves Godinho - Integrante / Monally Conceição Costa de Aquino - Integrante.