EDUARDO FURTADO FLORES

Pós-doutorado

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Participação em bancas

Orientou

Produções bibliográficas

• GOMES, VIVIANI ; BACCILI, CAMILA COSTA ; MARQUES, RAQUEL SOUSA ; SORIANO, SERGIO ; PEDROSO, NATÁLIA HETTWER ; Flores, Eduardo Furtado . Anamnestic response against bovine viral diarrhea virus and bovine herpesvirus type 1 in young Holstein heifers vaccinated with four different commercial formulations. CIÊNCIA RURAL , v. 54, p. 001-010, 2024.

• SILVA JÚNIOR, JOSÉ VALTER JOAQUIM ; Flores, Eduardo Furtado . Letter to the Editor: Should Viruses Exist? A Brief Reflection on the (Re)evolution of the Virus-Life Relationship. VIRAL IMMUNOLOGY , v. 00, p. 1-2, 2024.

• MERCHIORATTO, INGRYD ; MUCELLINI, CAROLINA ISABELA ; LOPES, THAÍSA REGINA ROCHA ; DE OLIVEIRA, PABLO SEBASTIAN BRITTO ; SILVA JÚNIOR, JOSÉ VALTER JOAQUIM ; BRUM, MÁRIO CELSO SPEROTTO ; WEIBLEN, Rudi ; Flores, Eduardo Furtado . Phylogenetic analysis of papillomaviruses in dogs from southern Brazil: molecular epidemiology and investigation of mixed infections and spillover events. BRAZILIAN JOURNAL OF MICROBIOLOGY , v. 1, p. 1-8, 2024.

• ALMEIDA, GISANE LANES DE ; MONTEIRO, FRANCIELLE LIZ ; MERCHIORATTO, INGRYD ; MORTARI, ANA PAULA GNOCATO ; Cargnelutti, Juliana Felipetto ; WEIBLEN, Rudi ; Flores, Eduardo Furtado . An RT-rtPCR assay for detection of rabies virus in bovine specimens. CIÊNCIA RURAL , v. 53, p. 001-008, 2023.

• MERCHIORATTO, INGRYD ; ROMAN, ISAC JUNIOR ; PEDROSO, NATÁLIA HETTWER ; OLIVEIRA, PABLO SEBASTIAN BRITTO DE ; SILVA JÚNIOR, JOSÉ VALTER JOAQUIM ; WEIBLEN, Rudi ; Flores, Eduardo Furtado . A glycoprotein E gene-deleted bovine alphaherpesvirus 1 strain is attenuated and immunogenic for calves with passive immunity upon intranasal immunization. CIÊNCIA RURAL , v. 53, p. 001-010, 2023.

• MERCHIORATTO, INGRYD ; DE OLIVEIRA, PABLO SEBASTIAN BRITTO ; SILVA JÚNIOR, JOSÉ VALTER JOAQUIM ; BRUM, MÁRIO CELSO SPEROTTO ; WEIBLEN, Rudi ; Flores, Eduardo Furtado . Phylogeny and amino acid analysis in single and mixed bovine papillomavirus infections in Southern Brazil, 2016-2020. ARCHIVES OF VIROLOGY , v. 168, p. 168:52, 2023.

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• CANTO, M.C. ; Flores, E.F. ; SILVA, A. M. ; BRUM , M.C.S. ; WEIBLEN, R. . Utilização de coelhos como modelo experimental para o estudo da neuropatogênese das encefalites pelo herpesvírus bovino tipo-5. (HVB-5).. In: IV Jornada Integrada de Pesquisa, Extensão e Ensino da UFSM., 1997, Santa Maria. IV Jornada Integrada de Pesquisa, Extensão e Ensino da UFSM., 1997. p. 593.

• Flores, E.F. ; BOTTON, S.A. ; GIL, L.H.V. ; PEREIRA, N.M. ; BRUM, M.C. ; WEIBLEN, R. . Antigenic and molecular characterization of Brazilian bovine viral diarrhea virus (BVDV).. In: 5ta Jornada de Investigación, Universidades Grupo Montevideo., 1997, São Bernardo, Paraguai. 5ta Jornada de Investigación, Universidades Grupo Montevideo., 1997. p. 131.

• SILVA, A.M. ; Flores, E.F. ; CANTO, M. ; CANABARRO, T.F. ; WEIBLEN, R. . A rabbit model for studying the biological and molecular basis of the neuropathogenic phenotype of bovine herpesvirus type-5 (BHV-5).. In: 5ta Jornada de Investigación, Universidades Grupo Montevideo., 1997, São Bernardo. 5ta Jornada de Investigación, Universidades Grupo Montevideo., 1997. p. 140.

• DA SILVA, A.M. ; Flores, E.F. ; WEIBLEN, R. . Bovine viral diarrhea virus (BVDV) virions specifically bind to a 25-30 KDA cellular protein. In: 4ª Jornada de Investigação, Associação de Universidades Grupo Montevideo., 1996, Porto Alegre. 4ª Jornada de Investigação, Associação de Universidades Grupo Montevideo., 1996. p. 144.

• CARGNELUTTI, JULIANA F. ; MARTINS, MATHIAS ; QUADROS, J. M. ; BATISTA, H. B. C. R. ; WEIBLEN, R. ; FLORES, E . Molecular characterization of glycoprotein G of rabies virus from cattle in the central Rio Grande do Sul state, Brazil. 2016. (Apresentação de Trabalho/Congresso).

Outras produções

Projetos de pesquisa

• 2020 - Atual

  Genética reversa para a produção de cepas vacinais de pestivírus de bovinos, Descrição: Os pestivírus de bovinos, vírus da Diarréia Viral Bovina 1 (BVDV-1), BVDV-2 e HoBi-like (HobiPeV), são importantes patógenos de bovinos e possuem grande impacto econômico e sanitário na bovinocultura em todo o mundo. A vacinação segue sendo a principal medida de controle dessas enfermidades, porém as vacinas disponíveis apresentam limitações quanto à eficácia e segurança. A tecnologia da genética reversa tem permitido grandes avanços na virologia, contribuindo para o conhecimento da biologia dos vírus, de suas interações com os hospedeiros e, sobretudo, para a confecção de vacinas mais eficazes e seguras. Utilizando a estratégia de recombinação homóloga em levedura Saccharomyces cerevisae, o nosso grupo construiu um clone infeccioso com o genoma do isolado brasileiro de BVDV-1 IBSP-4, permitindo a obtenção de vírus viável após transfecção de células susceptíveis. A introdução/clonagem de sequências de ubiquitina na junção entre as proteínas NS2-3 da proteína NS23 permitiu a sua clivagem e produção da NS3, tornando o vírus citopático (cp), biótipo mais adequado e seguro para a produção de vacinas. O presente projeto propõe a utilização/manipulação desse clone para a produção de cepas virais com fenótipo mais adequado para a produção de vacinas. Em uma primeira etapa, serão produzidos clones de cDNA contendo a região das proteínas estruturais (C-E0-E1-E2) de BVDV-2 e HobiPeV, utilizando-se o backbone do clone pBSC-IBSP4-NS2/3NADL. Com isso, considerando-se que o clone parental contém as proteínas estruturais do BVDV-1, poderão ser obtidos vírus citopáticos com características antigênicas das três espécies de pestivírus, permitindo a produção de vacinas trivalentes (BVDV-1/BVDV-2/HobiPeV) que confiram proteção de amplo espectro. Em uma segunda etapa, nos três clones construídos será também introduzida deleção parcial na Npro e deleção da histidina na posição 349 na E0, tornando as cepas seguras para uso em vacas prenhes, uma vez que essas mutações reduzem/eliminam a capacidade dos vírus atravessar a placenta e produzir infecção fetal persistente. A execução desse projeto permitirá a exploração das potencialidades do clone infeccioso previamente construído, viabilizando a obtenção de cepas vacinais com propriedades biológicas e antigênicas altamente desejáveis e, por isso, com grande potencial industrial/comercial. Além disso, a execução do projeto permitirá a sedimentação/consolidação da tecnologia de genética reversa em nosso laboratório, contribuído para o avanço científico-tecnológico e formação de recursos humanos.. , Situação: Em andamento; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Graduação: (1) / Mestrado acadêmico: (1) / Doutorado: (1) . , Integrantes: Eduardo Furtado Flores - Coordenador / Weiblen, R. - Integrante / Laura Gil - Integrante / Oliveira, P.S.B. - Integrante / Giovani Rota Bertani - Integrante / Jose Valter Joaquim Silva Jr - Integrante., Financiador(es): Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul - Auxílio financeiro., Número de produções C, T & A: 1

• 2020 - Atual

  Desenvolvimento de uma plataforma multiplex para diagnóstico molecular diferencial de COVID-19, Descrição: O presente projeto tem como objetivo3.1 Objetivo geral. Desenvolver uma plataforma multiplex para detecção molecular de SARS-CoV-2, influenza A (H1N1pdm09, H3N2 e não subtipado), influenza B e adenovírus. 3.1 Objetivos específicos. 1 - Desenvolver e otimizar uma reação mutiplex para detecção molecular de SARS-CoV-2, influenza A (H1N1pdm09, H3N2 e não subtipado), influenza B e adenovírus; 2 - Avaliar a especificidade da plataforma multiplex frente a amostras clínicas derivadas do trato respiratório de pacientes diagnosticados com síndrome respiratória aguda grave.. , Situação: Em andamento; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Graduação: (1) / Doutorado: (1) . , Integrantes: Eduardo Furtado Flores - Coordenador / Weiblen, R. - Integrante / José Valter Araujo Silva Jr - Integrante / Patricia Brites Lopes - Integrante / Priscila trindade - Integrante / Alexandre Swartzboldt - Integrante / Thaisa Regina Lopes Rocha - Integrante., Financiador(es): Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul - Auxílio financeiro.Número de orientações: 1

• 2015 - Atual

  Biotecnologia aplicada à saude animal, Projeto certificado pelo(a) coordenador(a) Paulo Michel Roehe em 24/06/2021., Descrição: A vacinologia, que compreende todos os aspectos relacionados à pesquisa e desenvolvimento de vacinas, tem avançado significativamente nos anos mais recentes. Entretanto, muitas das vacinas disponíveis para animais são ainda de baixa eficácia, frequentemente preparadas com amostras de microrganismos importados de outros países e, invariavelmente, não testadas frente a variantes desses mesmos agentes circulantes no Brasil, deixando para o produtor o encargo da avaliação empírica de sua efetividade, muitas vezes com resultados negativos. O presente projeto propõe o desenho de vacinas com um enfoque mais racional, baseado em antígenos de amostras de vírus circulantes no País, previamente analisados por vacinologia reversa e com potencial de induzir proteção mais efetiva contra os agentes-alvo. O projeto é composto por quatro subprojetos, assim denominados: subprojeto 1: ?Emprego de vacinologia reversa sobre genomas de herpesvírus bovinos ocorrentes no Brasil visando a produção de vacinas mais eficazes?; subprojeto 2: ?Estudos de eficácia pré-clínica no tratamento profilático contra o papilomavírus bovino (bovine papillomavirus - BPV) com vacinas baseadas nas proteínas L2 e L1-E7?; subprojeto 3: ?Uma vacina recombinante vetorial contra a raiva animal utilizando o parapoxvírus ovis como vetor?; subprojeto 4: ?Construção de uma amostra recombinante de parapoxvírus carreando a ORF2 do vírus da Hepatite E (Hepatitis E virus - HEV) para o controle da infecção em suínos?. Subprojeto 1: Será centrado no sequenciamento e análise por vacinologia reversa de genomas completos de amostras de diferentes tipos e subtipos de BoHVs ocorrentes no Brasil, visando identificar aquelas que apresentam maior potencial de induzir proteção cruzada frente a diferentes tipos e subtipos destes vírus. Serão determinadas as sequências genômicas completas de representantes de todos os subtipos de BoHV-1 e BoHV-5 circulantes no Brasil e comparados com outros herpesvírus de ruminantes, inclusive com amostras utilizadas na produção de vacinas. Estas serão analisadas por vacinologia reversa para identificar aquelas com maior potencial para uso como amostras vacinais. Subprojeto 2: Visa desenvolver vacinas contra o BPV contendo a proteína L2 do capsídeo viral de diferentes BPVs enxertados à tioredoxina com distintos epítopos de células T auxiliares, formulada com diferentes adjuvantes e avaliar a resposta imune frente a estes imunógenos em bovinos. Subprojeto 3: Visa construir e caracterizar in vitro recombinantes expressando a glicoproteína do vírus da raiva (G) de um vírus da raiva de origem autóctone em um vetor parapoxvírus (ORFV) e avaliar a magnitude e duração da resposta imune humoral e celular induzida pela vacinação de bovinos com os recombinantes gerados. Subprojeto 4: Visa construir e caracterizar um recombinante expressando o gene codificante da ?open reading frame? (ORF2) do HEV ou regiões de interesse deste ORF selecionados por vacinologia reversa em um vetor parapoxvírus (ORFV). O potencial imunogênico desse recombinante será avaliado em estudos in vitro.. , Situação: Em andamento; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Graduação: (8) / Mestrado acadêmico: (4) / Doutorado: (6) . , Integrantes: Eduardo Furtado Flores - Integrante / Weiblen, R. - Integrante / ROEHE, PAULO M. - Coordenador / CANAL, C.W. - Integrante / Fernando R Spilki - Integrante / Ravazzolo Ana Paula - Integrante / Andre Felipe Strack - Integrante / Juliana F Carngelutti - Integrante / Tais Fumaco Teixeira - Integrante., Financiador(es): Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul - Auxílio financeiro., Número de produções C, T & A: 2

• 2014 - 2019

  Construção e caracterização de um vírus recombinante do herpesvírus bovino tipo 1 defectivo no gene da glicoproteína E para desenvolvimento de uma vacina diferencial, Descrição: O herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) tem uma grande importância na indústria e criação de bovinos, sendo geralmente associado a distúrbios respiratórios e reprodutivos. Uma das medidas de controle adotadas para o controle desta enfermidade é a vacinação. Vacinas comerciais tradicionais são compostas pela partícula viral inativada ou atenuada, porém a adoção da produção de vacinas que contenham algum tipo de manipulação genética do vírus já podem ser encontradas comercialmente, principalmente em alguns países europeus. Dentre os alvos estudados, a deleção da glicoproteína E (gE) se mostra uma das mais adequadas para a deleção, visto que além de oferecer a oportunidade de diferenciação entre animais vacinados e naturalmente infectados, a deleção na gE traz vantagens biológicas à vacina, visto que esta está implicada no transporte anterógrado deste vírus nos neurônios de animais infectados. Este projeto traz a proposta que a deleção da gE seja realizada em uma cepa viral de BoHV-1 isolada em território brasileiro com o objetivo final de que esta possa a ser futuramente disponibilizada para comercialização, contribuindo assim para a melhora sanitária do rebanho brasileiro. Palavras-chave: Herpesvírus bovino tipo 1, vacina diferencial, deleção, glicoproteína E. 3. JUSTIFICATIVA As perdas econômicas (problemas respiratórios e reprodutivos) causadas pelo Herpesvírus Bovino tipo 1 (BoHV-1), de um modo geral, podem ser minimizadas pela aplicação de algum método de controle desta enfermidade. Um dos métodos de controle desta enfermidade é o uso de vacinas que visam controlar os sinais clínicos. As vacinas utilizadas no Brasil são manufaturadas utilizando a partícula inteira do vírus, porém a grande dificuldade encontrada com a utilização deste tipo de vacina é a posterior impossibilidade de diferenciação entre os animais naturalmente infectados e os animais que receberam a vacinação. Alguns países da Europa estão utilizando uma vacina que apresenta a deleção do gene que codifica a glicoproteína E (gE) do BoHV-1, sendo que a principal vantagem da utilização desta vacina sobre as vacinas convencionais é a possibilidade de diferenciação sorológica dos animais vacinados e naturalmente infectados. A possibilidade de diferenciação sorológica entre animais vacinados e naturalmente infectados é de grande importância principalmente no caso de países que visam a erradicação desta doença dos seus rebanhos. Até o momento, o Brasil não dispõe de nenhuma amostra viral do BoHV-1 deletada da gE para o uso em vacinas portanto o nosso projeto se dispõe a preencher esta lacuna visando a futura possível produção de uma vacina comercial.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Alunos envolvidos: Graduação: (1) / Mestrado acadêmico: (1) / Doutorado: (1) . , Integrantes: Eduardo Furtado Flores - Coordenador / Weiblen, R. - Integrante / Martins, M. - Integrante / WEISS, MARCELO - Integrante / ANZILIERO, D. - Integrante., Financiador(es): Laboratório Biovet - Auxílio financeiro., Número de produções C, T & A: 1

• 2011 - 2014

  Mecanismos imunológicos envolvidos na atividade imunomodulatória do vírus do ectima contagioso (ORFV) e avaliação do efeito imunoestimulante em modelos vacinais e/ou imunoterápicos, Descrição: A atividade imunomodulatória de formulações inativadas do vírus do ectima contagioso (ORFVi) já foi demonstrada em várias enfermidades infecciosas de animais, porém os mecanismos imunológicos envolvidos permanecem pouco conhecidos. O presente projeto objetiva investigar os mecanismos imunológicos humorais e celulares responsáveis pela atividade imunoestimulante do ORFV e, assim, fundamentar a sua utilização como imunoestimulante em vacinações e/ou imunoterapias. O subprojeto 1 pretende investigar os efeitos do ORFVi sobre funções específicas de macrófagos peritoniais, esplenócitos e leucócitos do sangue periférico (PBMCs) de camundongos, após estimulação in vivo e in vitro. Para isso, camundongos serão inoculados pela via intraperitoneal (IP) com partículas inativadas do ORFV. Macrófagos peritoneais, PBMCs e esplenócitos serão coletados e avaliados in vitro com relação a atividade fagocítica (Mᶲ) e produção de citocinas da resposta inata (Mᶲ, PBMCs e esplenócitos). O soro desses animais será coletado para avaliar-se a sua atividade bactericida e da lisozima. Também será avaliada a atividade fagocítica in vivo de Mᶲ peritoniais previamente estimulados com o ORFVi. O subprojeto 2 pretende identificar as células envolvidas na resposta imune inata que após a inoculação do ORFVi, tanto no sítio de inoculação quanto nos linfonodos regionais. Para isso, partículas do ORFVi serão inoculadas no músculo da coxa de coelhos e, a diferentes intervalos após a inoculação, biópsias de tecido muscular e dos linfonodos regionais serão coletadas e submetidas a imunohistoquímica (IHQ) com anticorpos específicos para identificar células potencialmente envolvidas na resposta inata. No subprojeto 3, pretende-se investigar o efeito do ORFVi sobre a resposta imunológica em três modelos vacinais e/ou ou seja i. a resposta sorológica de cobaias frente à imunizações com o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e vírus da diarréia viral bovina (BVDV), ii. a imunoterapia ao Phytium insidiosum em eqüinos e, iii. na imunoterapia autógena na papilomatose bovina. Esses experimentos objetivam avaliar objetivamente a ação do ORFVi e, eventualmente, a sua aplicabilidade como auxiliar em terapias/imunoterapias de determinadas doenças infecciosas de animais. Antecipa-se que os resultados obtidos neste projeto auxiliarão a esclarecer os mecanismos imunológicos celulares e humorais envolvidos na atividade imunoestimulante do ORFVi, servindo de base científica e permitindo a sua utilização como adjuvante/imunomodulador em doenças infecto-contagiosas e/ou parasitárias de interesse veterinário.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Eduardo Furtado Flores - Coordenador / Weiblen, R. - Integrante / KREUTZ, L. C. - Integrante / Denis Anziliero - Integrante / Fernando R. Spilki - Integrante., Financiador(es): Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul - Auxílio financeiro.

• 2011 - 2013

  Construção de vírus quiméricos com a cepa 17-D do vírus da febre amarela expressando as glicoproteínas prM/E do vírus do Nilo Ocidental para uso em diagnóstico e vacinas, Descrição: O vírus do Nilo Ocidental (WNV) é um dos patógenos emergentes mais importantes das Américas pelo seu potencial zoonótico e pelo seu impacto na eqüideocultura. A introdução potencial do WNV no Brasil, onde encontraria as condições ecológicas ideais para propagação e manutenção, é motivo de grande preocupação de autoridades sanitárias das áreas humana e animal. Nesse sentido, o monitoramento sorológico de eqüinos e aves silvestres em regiões limístrofes, assim como a disponibilidade de vacinas para uso imediato, devem compor a estratégia de prevenção da enfermidade. Não obstante essa premência, tanto a produção de testes diagnósticos quanto a produção de vacinas estão em compasso de espera, pois a manipulação do vírus é restrita a laboratórios BSL-3, e não é atualmente permitida no Brasil. Como forma de solucionar esse impasse e evoluir na construção de uma estratégia de diagnóstico e controle, o presente projeto propõe a construção de vírus quiméricos, utilizando a cepa vacinal 17-D do YFV (17-D) como plataforma. Vírus quiméricos YFV/WNV serão construídos pela inserção dos genes das glicoproteínas prM/E do WNV no genoma do vetor e caracterizados in vitro. Atenuação adicional dos vírus quiméricos será produzida pela introdução de mutações em ponto específicas nos genes prM/E. A virulência/atenuação dos vírus quiméricos com e sem as mutações será avaliada pela inoculação em camundongos. Em uma segunda etapa, o vírus quimera YFV/WNV será utilizado para o estabelecimento de um protocolo de diagnóstico sorológico. Será utilizado para a produção de antígeno para o desenvolvimento de um teste ELISA para detecção de IgG e IgM em soro eqüino; e subsequentemente será utilizado no teste de redução de placas (PRNT) para determinar a especificidade das reações positivas no ELISA. Antecipa-se que a construção e caracterização dos vírus quiméricos YFV/WNV representará uma etapa importante na estratégia de prevenção desta zoonose, fornecendo ferramentas para o seu diagnóstico e vigilância, além de disponibilizar uma tecnologia avançada para a produção de vacinas eficazes para uso animal e, eventualmente, humano. Além disso, o desenvolvimento do projeto resultará na implementação da tecnologia e formação de recursos humanos nesta importante área da biotecnologia aplicada à saúde humana e animal.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Eduardo Furtado Flores - Coordenador / Weiblen, R. - Integrante / GIL, L.H.V. - Integrante / sandra arenhart - Integrante / Cargnelutti, Juliana Felipetto - Integrante., Financiador(es): Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - Auxílio financeiro.

• 2010 - 2012

  Vírus do Ectima Contagioso (ORFV): caracterização molecular de isolados ovinos e caprinos; desenvolvimento de um teste sorológico imunoenzimático e produção de uma vacina em cultivo celular, Descrição: O ectima contagioso (ou orf) é uma doença infecto-contagiosa debilitante que afeta ovinos e caprinos, e que ocasionalmente pode acometer o homem. A doença é causada por um parapoxvírus, o vírus da ORFV (ORFV). O ORFV produz lesões proliferativas, geralmente na comissura labial e no plano naso-labial de cordeiros, com rápida disseminação e morbidade que pode chegar a 90% dos animais do rebanho. A doença resulta em sérias conseqüências para a produtividade do rebanho. O ectima contagioso é endêmico nas regiões criadoras de ovinos e caprinos do Brasil, e se constitui em um dos principais problemas sanitários dessas espécies. Embora o ORFV circule entre ovinos e caprinos, pouco se sabe sobre a sua real distribuição, epidemiologia e características genéticas e moleculares das amostras de campo, o que dificulta o seu controle. A doença pode ser controlada por vacinação, mas essa estratégia ainda é incipiente no Brasil. Além da falta de oferta de vacinas eficazes, o método de produção é empírico, cruento e não permite a obtenção de doses em grande escala. Assim, o presente projeto propõe: 1. Isolamento e caracterização molecular (filogenia) de isolados de ORFV de ovinos e caprinos; 2. Desenvolvimento e avaliação de uma vacina produzida em cultivo celular. 3. Desenvolvimento e padronização de um teste sorológico imunoenzimático (ELISA); No objetivo 1, pretende-se obter uma coleção de amostras de ORFV circulantes na população ovina do Rio Grande do Sul, maior região produtora de ovinos do país. Também serão obtidas amostras de caprinos de Estados do Nordeste. As amostras serão submetidas a sequenciamento parcial do gene B2L, seguido de análise filogenética. Com isso espera-se caracterizar os genótipos mais circulantes nas duas espécies, com fins epidemiológicos e produção de uma vacina. No objetivo 2, propõe-se a produção de uma vacina experimental em cultivo celular (evitando-se o método cruento atual). Para tal serão escolhidos as duas amostras ovinas, que melhor representem as amostras circulantes e que repliquem a altos títulos em cultivo. Após a amplificação em cultivo, a vacina experimental será testada com relação a atenuação e inocuidade em ovinos e caprinos e, posteriormente com relação a capacidade protetora frente a desafio em ovinos. Posteriormente, será disponibilizada a laboratórios interessados em produzi-la e comercializá-la. O teste imunoenzimático (objetivo 3) será desenvolvido paralelamente, para uso em estudos soro-epidemiológicos (prevalência, distribuição geográfica) e para estudos de duração de imunidade passiva e proteção vacinal. Com a execução deste projeto, pretende-se contribuir para o melhor conhecimento da epidemiologia do ectima contagioso, além disponibilizar ferramentas para o diagnóstico molecular e sorológico e, por fim, disponibilizar uma vacina efetiva para reduzir as perdas causadas pela enfermidade.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Eduardo Furtado Flores - Coordenador / Weiblen, R. - Integrante / Denis Anziliero - Integrante / Cargnelutti, Juliana Felipetto - Integrante / Schmidt, C. - Integrante., Financiador(es): Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - Auxílio financeiro.

• 2008 - 2010

  AVALIAÇÃO DA ATENUAÇÃO, IMUNOGENICIDADE, CARÁTER DIFERENCIAL E PROTEÇÃO CONFERIDA POR UMA CEPA VACINAL RECOMBINANTE DO HERPESVÍRUS BOVINO TIPO 5 DEFECTIVA NA GLICOPROTEÍNA gE E ENZIMA TIMIDINA KINASE, Descrição: Os herpesvírus bovino tipos 1 (BoHV-1) e 5 (BoHV-5) são importantes patógenos de bovinos e estão associados com doença de repercussão sanitária e econômica no rebanho bovino brasileiro. Vacinas com marcadores antigênicos (vacinas diferenciais) - associadas a testes sorológicos específicos que permitem distinguir entre animais vacinados e infectados - têm sido utilizadas com sucesso em programas de erradicação do BoHV-1 em vários países europeus e nos Estados Unidos. O presente projeto propõe a avaliação in vivo da cepa recombinante SV-507dltkdlgE com vistas a obtenção de conhecimento acerca de sua atenuação, imunogenicidade e capacidade de induzir uma resposta sorológica diferenciável da infecção natural e de proteger bovinos frente à exposição ao BoHV-1 e BoHV-5. O subprojeto # 1 avaliará a atenuação da cepa recombinante em coelhos e bezerros. Para isto, coelhos e bezerros serão inicialmente inoculados pela via intranasal, seguido do monitoramento virológico e clínico da infecção aguda. A seguir, a atenuação será avaliada após a inoculação intramuscular em bezerros, seguida do monitoramento virológico e clínico da infecção aguda e da reativação da infecção latente. O subprojeto # 2 avaliará a imunogenicidade da cepa recombinante em bovinos, pela vacinação e realização de testes sorológicos a diferentes intervalos após a vacinação. Também investigará a capacidade da cepa recombinante de induzir resposta sorológica diferenciável da infecção natural. Para isto, bovinos serão vacinados com a cepa recombinante ou inoculados com vírus de campo (BoHV-1 e BoHV-5), e as amostras de soro coletadas a diferentes intervalos serão testadas com um teste ELISA anti-gE. O subprojeto # 3 investigará a capacidade da cepa recombinante de induzir resposta imune protetora frente ao BoHV-1 e BoHV-5 em bovinos. Para isto, grupos de bezerros serão vacinados e posteriormente desafiados com isolados virulentos de BoHV-1 e BoHV-5. A proteção vacinal será avaliada com base em parâmetros virológicos. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Eduardo Furtado Flores - Coordenador / Weiblen, R. - Integrante / Denis Anziliero - Integrante / Cargnelutti, Juliana Felipetto - Integrante / mathias martins - Integrante., Financiador(es): Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - Auxílio financeiro.

• 2008 - 2010

  DESENVOLVIMENTO DE UM TESTE IMUNOENZIMÁTICO PARA A DETECÇÃO DE ANTICORPOS CONTRA O VÍRUS DA DIARRÉIA VIRAL BOVINA (BVDV) EM TANQUES COLETIVOS DE LEITE E IDENTIFICAÇÃO DE REBANHOS LEITEIROS COM ANIMAIS PERSISTENTEMENTE INFECTADOS NO RIO GRANDE DO SUL, Descrição: Do ponto de vista sanitário e econômico, o vírus da Diarréia Viral Bovina (BVDV) é considerado o agente viral mais importante de bovinos, após o vírus da Febre Aftosa. Vários estudos têm demonstrado que a infecção pelo BVDV está amplamente distribuída no rebanho bovino do Brasil, sobretudo em gado de leite, onde infecção tem sido associada com uma variedade de manifestações clínicas e a perdas reprodutivas. O ponto-chave do controle da infecção pelo BVDV é a identificação e remoção dos animais persistentemente infectados (PI). Rebanhos que possuem animais PI geralmente apresentam altos níveis de anticorpos específicos no leite, podendo assim ser identificados à distância, por testes que detectem anticorpos no leite. Nesse sentido, o presente projeto propõe uma abordagem aplicada para o diagnóstico do BVDV em nível populacional e identificação de rebanhos leiteiros infectados: 1. Desenvolvimento e padronização de uma técnica imunoenzimática do tipo ELISA para a detecção de anticorpos contra o BVDV no leite de tanques coletivos; 2. Identificação de rebanhos com níveis altos de anticorpos no leite e potencialmente portadores de animais persistentemente infectados (PI) no rebanho leiteiro do RS; 3. Difusão e disponibilização do teste para laboratórios, técnico e/ou cooperativas de produtores. O teste imunoenzimático a ser desenvolvido será do tipo de captura, com o uso de um anticorpo monoclonal (AcM 6d11), específico para a glicoproteína gp53/E2 do BVDV. O teste será padronizado para detectar amostras de leite com altos títulos de anticorpos. Após a padronização, o teste será utilizado para testar amostras coletivas de leite de 50.000 propriedades leiteiras (abrangendo aproximadamente 1.500.000 vacas em produção) no RS. A coleta das amostras será feita no CEPA-UPF, Passo Fundo, unidade que realiza a contagem total de células somáticas do leite. A terceira etapa será a difusão e disponibilização do teste, com treinamento de técnicos interessados para aplicação em outras bacias leiteiras. A detecção de anticorpos em amostras coletivas de leite representa uma ferramenta de extrema utilidade para a identificação de rebanhos com infecção ativa. A identificação de rebanhos positivos permitirá a subseqüente identificação e remoção de animais PI das propriedades. Nesse sentido, o presente projeto pretende objetivamente contribuir para o diagnóstico e controle da infecção pelo BVDV no Brasil, contribuindo assim para o incremento da sanidade e produtividade do rebanho leiteiro do RS. Esta tecnologia ? e estratégia ? poderá ser utilizada posteriormente para o diagnóstico de outras importantes viroses de gado leiteiro.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Eduardo Furtado Flores - Coordenador / N. M. PEREIRA - Integrante / Weiblen, R. - Integrante / BRUM , M.C.S. - Integrante / Marcelo Weiss - Integrante / Sturza, D.A.F. - Integrante., Financiador(es): Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - Auxílio financeiro.

• 2004 - 2007

  CONSTRUÇÃO E AVALIAÇÃO DE RECOMBINANTES DO HERPESVÍRUS BOVINO TIPO 1 (BHV-1) DEFECTIVOS NA GLICOPROTEÍNA gE E ENZIMA TIMIDINA KINASE (TK) PARA USO EM VACINAS, Descrição: O herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1) é considerado um dos principais patógenos de bovinos e causa prejuízos vultuosos à pecuária bovina. Programas de controle e erradicação do BHV-1 baseiam-se em práticas de manejo e vacinação, associados à identificação e remoção de animais soropositivos. No entanto, as vacinas tradicionais são incompatíveis com programas de controle/erradicação, pela impossibilidade de distinguir-se sorologicamente animais vacinados de animais portadores. Este fato pode ser preponderante para a imposição de barreiras comerciais para animais, material genético e subprodutos de áreas endêmicas. Vacinas com marcadores antigênicos (vacinas diferenciais) - associadas a testes sorológicos específicos que permitem distinguir entre animais vacinados e infectados - têm sido utilizadas com sucesso em programas de erradicação do BHV-1 em vários países europeus e nos Estados Unidos. O presente projeto propõe a produção e avaliação como imunógeno de cepas recombinantes do BHV-1, com deleção nos genes que codificam a glicoproteína gE (como marcador antigênico) e no gene que codifica a enzima timidina kinase (tk, para atenuação). Os vírus recombinantes serão produzidos a partir de um isolado brasileiro de BHV-1 (SV-56/90). Serão produzidos recombinantes defectivos na expressão individual da glicoproteína E (gE) e da timidina kinase (tk) e subseqüentemente recombinante com deleção dupla (gE-; tk-). Os vírus recombinantes serão caracterizados in vitro em relação à cinética de replicação, ausência de expressão da proteína deletada, seqüenciamento do segmento deletado; e in vivo: atenuação, capacidade replicativa, imunogenicidade (indução de anticorpos neutralizantes, espectro de reatividade, proteção frente à desafio). A capacidade do recombinante vacinal (gE-, tk-) em induzir resposta sorológica diferenciável da infecção natural (ou vacinação tradicional) será avaliada através do teste do soro de animais vacinados e/ou infectados com um ELISA diferencial gE. O desenvolvimento de uma vacina com marcador antigênico, associado a um teste diferencial, representará um importante avanço no combate à infecção no Brasil, além de representar um avanço tecnológico na produção de vacinas recombinantes de uso veterinário.. , Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa. , Integrantes: Eduardo Furtado Flores - Coordenador / Weiblen, R. - Integrante / Denis Anziliero - Integrante / Marcelo Weiss - Integrante / Cargnelutti, Juliana Felipetto - Integrante., Financiador(es): Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - Auxílio financeiro.

Prêmios